基于“线粒体能量代谢”探讨左归丸干预肾阴虚证“阳中求阴”的作用机理

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目的通过观察左归丸组及其拆方组(滋阴组、补阳组)对采用甲状腺素片与利血平混合悬浮液法诱导的肾阴虚大鼠肝组织中线粒体形态结构及酶活性的影响,探讨肾阴虚证与能量代谢之间的相关性,并揭示左归丸“阳中求阴”治疗肾阴虚证的机理,研究左归丸及其拆方组(滋阴组、补阳组)对肾阴虚大鼠肝组织中线粒体结构及酶活性的变化,探讨“阳中求阴”科学内涵。方法选取SPF级雄性SD大鼠56只,在实验室进行为期一周的适应性饲养。对照组除外,剩余大鼠统一采用甲状腺素片与利血平联合灌胃制备肾阴虚证模型。再将造模成功后的实验动物用随机数表法分为模型组、滋阴组、补阳组、左归丸组。给予滋阴组、补阳组、左归丸组,其中左归丸组按照生药剂量9.45g/kg灌胃,滋阴组按照生药剂量为7.29g/kg灌胃,补阳组按照生药剂量2.16g/kg灌胃量,灌胃体积均为7.5m L/kg,对照组及模型组灌胃等体积生理盐水,每日一次,成功干预后,进行下腔静脉采血及提取肝组织线粒体,用ELISA测定肝组织线粒体中Na+-K+-ATPase、LDH、SDH、CCO活性及ATP含量的变化,电镜下观察大鼠肝组织线粒体结构的变化,测定各组实验大鼠血清中c AMP与c GMP比值的改变。结果1模型组大鼠血清中c AMP与c GMP比值的改变:与对照组比较,模型组大鼠血清中c AMP/c GMP比值升高显著(P<0.01)。2左归丸及其拆方组(滋阴组、补阳组)对肾阴虚大鼠肝线粒体酶活性及ATP含量的影响:与对照组比较,模型组大鼠肝线粒体酶Na+-K+-ATPase、SDH、LDH、CCO活性及ATP含量均升高,差异显著(P<0.01),与模型组比较,滋阴组、补阳组、左归丸组肝线粒体酶Na+-K+-ATPase、LDH、SDH、CCO活性及ATP含量均下降,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01),且左归丸组疗效最佳(P<0.01)。3各组实验大鼠肝组织线粒体结构的改变:与对照组比,模型组线粒体发生明显肿胀,嵴排列紊乱、断裂消失;与模型组相比,药物干预组大鼠肝线粒体病理损伤明显减轻,且左归丸组效果最佳,接近对照组。结论1采用甲状腺素片与利血平混合悬浮液法可成功制备肾阴虚证模型。2模型组大鼠经药物干预后,肝组织中线粒体Na+-K+-ATPase、SDH、CCO活性及ATP含量均下降,提示左归丸组及其拆方组可能作用于线粒体,通过调节酶活性来改善机体能量代谢水平,进而发挥治疗作用。3左归丸及其拆方组可能通过改善线粒体病理结构来影响线粒体能量代谢水平,因此,线粒体结构发生改变也是影响能量代谢水平的靶点之一。4左归丸全方组在治疗肾阴虚证方面优于单纯拆方滋阴组及拆方补阳组,证实左归丸“阳中求阴”配伍意义,进一步体现“阳中求阴”法的配伍价值。
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