【摘 要】
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目的:检测结直肠癌细胞系中透明质酸和CD44v6的表达,探究其是否参与了奥沙利铂耐药;探究透明质酸寡糖能否竞争性取代透明质酸(HA),提高奥沙利铂化疗的敏感性;合成透明质酸寡糖修饰的奥沙利铂脂质体纳米颗粒(oHA-LipidOxa),并对其表征进行检测,通过体外和体内实验评价oHA-Lipid-Oxa的治疗效果。方法:1.培养正常的结肠上皮细胞NCM460和结直肠癌
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目的:检测结直肠癌细胞系中透明质酸和CD44v6的表达,探究其是否参与了奥沙利铂耐药;探究透明质酸寡糖能否竞争性取代透明质酸(HA),提高奥沙利铂化疗的敏感性;合成透明质酸寡糖修饰的奥沙利铂脂质体纳米颗粒(oHA-LipidOxa),并对其表征进行检测,通过体外和体内实验评价oHA-Lipid-Oxa的治疗效果。方法:1.培养正常的结肠上皮细胞NCM460和结直肠癌细胞系HT-29、RKO,分别通过流式细胞术和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测其中CD44v6和HA的表达。2.检测HT-29和RKO细胞中奥沙利铂24小时的半抑制浓度,验证HA和CD44v6的表达量与奥沙利铂敏感性的关系。3.选取高表达透明质酸的RKO细胞株,加入透明质酸合成酶抑制剂(4-MU),通过MTT试验检测透明质酸对奥沙利铂化疗敏感性的影响。4.蛋白免疫印迹(WB)联合短臂化学交联剂BS3检测了oHA对透明质酸的竞争取代作用,并通过流式细胞术检测了oHA对奥沙利铂敏感性的影响。5.通过薄膜水化法制成oHA-Lipid-Oxa,并通过透射电镜和粒度分析仪对其表征进行评价。6.通过流式细胞术评价oHA-Lipid-Oxa体外治疗效果,并建立裸鼠荷瘤模型,通过尾静脉给药(PBS,oHA,Oxa,Lipid-Oxa,oHA-Lipid-Oxa),观察裸鼠体重和肿瘤体积变化,最后剥瘤行HE染色,观察组织坏死状况。结果:1.相比于正常的结肠上皮细胞NCM460,两株结直肠癌细胞会表达更高的CD44v6和HA。奥沙利铂对HT-29、RKO两株结直肠癌细胞的24小时IC50分别为40μM,74μM,可以发现透明质酸的表达量越高,化疗敏感性越低。通过MTT实验发现,加入4MU能够提高化疗敏感性(增殖率49%vs35%,p
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