目的恶性增殖和逃避细胞死亡是肿瘤形成的标志。本课题基于结肠癌在中医学中的阴虚、热毒、血瘀等病因病机特点,探讨养阴化瘀解毒方（Yangyin Huayu Jiedu Decoction,YYHYJDD）含药血清对常低氧环境下的结肠癌细胞增殖与凋亡影响的作用机制,为结肠癌的治疗和科研实践提供思路。方法1.常氧条件下养阴化瘀解毒方含药血清对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响:（1）采用MTS比色法,检测YYHYJDD含药血清在常氧条件下对结肠癌HCT116细胞增殖的影响;（2）AOEB染色法观察含药血清对HCT116细胞形态学变化的影响;（3）Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞术法检测含药血清对结肠癌HCT116细胞凋亡的影响;（4）蛋白质免疫印迹法（Western Blot）检测结肠癌HCT116细胞凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白（Bax）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）前体蛋白的表达情况。2.不同氧浓度对结肠癌HCT116细胞增殖的影响:（1）建立（1%O₂、5%O₂、20%O₂）氧浓度模型,MTS法检测不同氧浓度对结肠癌HCT116细胞增殖的影响,筛选出结肠癌细胞增殖最强的和最慢的氧气浓度;（2）将筛选的氧浓度进行Annexin V-FITC/PI双染法检测HCT116细胞增殖周期、凋亡情况;（3）荧光定量PCR检测结肠癌HCT116细胞在不同氧浓度下HIF-1αm RNA基因的表达情况;（4）蛋白检测结肠癌HCT116细胞在两种氧浓度下HIF-1α蛋白表达情况。3.低氧条件下YYHYJDD含药血清对结肠癌HCT116细胞增殖与凋亡的影响:（1）采用MTS比色法,检测YYHYJDD含药血清在低氧条件下对结肠癌细胞增殖的影响;（2）AOEB染色观察含药血清对结肠癌HCT116细胞凋亡形态学变化;（3）Annexin V-FITC/PI双染后流式法细胞术后检测含药血清对HCT116细胞凋亡情况;（4）Western Blot检测低氧诱导因子1α（HIF-1α）及下游Bcl-2、Bax、Caspase-3前体相关靶蛋白的表达情况。结果1.常氧条件下养阴化瘀解毒方含药血清对结肠癌细胞增殖与凋亡检测结果:（1）与空白血清对照组相比,养阴化瘀解毒方含药血清低中高剂量组细胞的活性抑制从48 h开始出现明显趋势,抑制率在72 h最强（P<0.05,P<0.01）;（2）干预48h AOEB染色HCT116细胞呈现不同时期的凋亡形态;（3）流式细胞术显示低中高剂量含药血清组干预HCT116细胞晚期凋亡明显,总凋亡率与空白对照组相比差异显著（P<0.01）;（4）Western Blot结果YYHYJDD含药血清在高剂量浓度组下调Bcl-2、Caspase-3前体蛋白表达,中高剂量浓度组Bax的表达上调,Bcl-2/Bax比值下调（P<0.05,P<0.01）。2.1%O₂、5%O₂、20%O₂的三种不同的氧气条件检测结果:（1）HCT116细胞24 h至96 h结肠癌细胞出现增长趋势,与1%O₂和20%O₂条件相比,5%O₂下HCT116细胞增殖速度最快（P<0.05,P<0.01）,与1%O₂和5%O₂相比,20%O₂条件下HCT116细胞增殖速度相对较慢（P<0.05,P<0.01）;（2）流式周期和凋亡实验:5%O₂的结肠癌细胞在S期和G2/M期比值大于20%O₂条件下的结肠癌细胞（P<0.05,P<0.01）;（3）Western Blot结果,与20%O₂相比,5%O₂条件下HIF-1α蛋白水平上调（P<0.01）。3.低氧条件下养阴化瘀解毒方含药血清对结肠癌细胞增殖、凋亡检测结果:（1）与低氧空白对照组相比,YYHYJDD含药血清干预HCT116细胞在48 h、72 h抑制率最显著（P<0.05,P<0.01）;（2）AOEB染色含药血清干预结肠癌细胞凋亡随含药血清的浓度增加而增大（P<0.05,P<0.01）;（3）流式结果YYHYJDD含药血清能促进HCT116细胞发生凋亡（P<0.05,P<0.01）;（4）Western Blot结果该方含药血清在低中高三个剂量浓度组能上调Bax的表达（P<0.01）,可以在中剂量浓度组下调Bcl-2的表达（P<0.05）,高剂量浓度组有下调Caspase-3前体蛋白的趋势,在中高剂量浓度组能够下调HIF-1α表达（P<0.05）。结论1.常氧条件下养阴化瘀解毒方含药血清能够抑制结肠癌HCT116细胞增殖活性,可能通过下调Bcl-2/Bax比值、Caspase-3前体蛋白的表达,发挥促凋亡的作用。2.5%O₂氧浓度结肠癌细胞增殖速度最快、可能的机制是使结肠癌细胞的增殖停留在S、G2/M期,并在分子水平上调HIF-1α蛋白的表达。3.养阴化瘀解毒方含药血清也可在低氧条件下有一定的时效性、抑制结肠癌HCT116细胞增殖,并使细胞凋亡形态和凋亡率发生改变,发挥促凋亡的作用,可能与下调HIF-1a的表达及其下游相关的的信号分子Bcl-2/Bax的比值、Caspase-3前体蛋白的表达有关。