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目的：喉癌作为耳鼻咽喉-头颈外科常见的恶性肿瘤之一,近年来其发病率有逐年上升趋势。喉癌的发生、发展及浸润转移是一个多因素、多阶段和多基因参与的过程,由多种癌基因的激活、抑癌基因的失活及凋亡基因的失控相互作用引起的。本实验通过检测胶原三股螺旋重叠蛋白1(CTHRC1)在喉癌组织中的表达水平,分析CTHRC1的表达与各临床病理因素之间的关系及临床意义,初步研究其在喉癌发生发展中的意义,为喉癌的早期诊断及基因治疗提供基础理论依据。方法：实验对象：材料来源于天津医科大学第二医院2008年2月至2013年10月耳鼻咽喉-头颈外科的住院的喉癌手术患者,选取喉鳞癌标本62例,均经病理证实为鳞状细胞癌,临床分期采用国际抗癌协会(UICC)2002年公布的TNM分类分期标准Ⅰ、Ⅱ期42例,Ⅲ期20例,声门上型33例,声门型29例。年龄42-75岁,中位年龄59岁。对声门型Ⅰ、Ⅱ期喉癌行喉部分切除术,Ⅲ期行次全切除喉或全切术,声门上型Ⅰ、Ⅱ期行水平半喉切除,Ⅲ期行喉次全切除或喉全切除术,其中15例获得相应声门上型癌旁喉正常粘膜作为对照(取距癌缘5mm处),经病理证实为炎症或正常粘膜,其中男性56例,女性6例,高分化38例,中分化14例,低分化10例,有淋巴结转移的有13例,无淋巴结转移的有49例；上述组织为喉鳞癌石蜡标本。为了验证免疫组化的结果,我们收集20例声门上型和声门型喉鳞癌组织与癌旁5mm以上的正常上皮组织(经病理证实无瘤组织浸润)的冰冻(-80)标本提取mRNA。其中男18例,女2例,高-中分化17例,低分化3例,Ⅰ、Ⅱ期12例,Ⅲ期8例,淋巴结转移5例,无淋巴结转移15例,全部患者术前均未接受放射治疗和化学治疗,临床资料完整,通过伦理委员会审查。1应用免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC) S-P二步法检测62例喉鳞癌组织,15例癌旁喉正常粘膜中CTHRC1基因的蛋白表达情况,并检测CTHRC1是否有淋巴结转移时存在表达差异,并统计分析它们与临床病理因素的相关性。2应用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测20例喉鳞癌冰冻(-80℃)组织及20例癌旁喉正常粘膜中CTHRC1的uRNA表达情况,并统计分析验证它们与临床病理因素的相关性。3统计学处理：应用SPSS19.0统计软件对数据进行统计分析,采用Pearson’s Chi-Square检验分析CTHRC1mRNA及蛋白的表达与喉鳞癌患者临床病理因素的关系；RT-PCR结果采用Independent-Samples T检验分析。以P<0.05为差异在统计学上有意义,以P<0.01为差异在统计学上有非常显著意义。结果：1CTHRC1mRNA及蛋白在喉鳞癌组织和癌旁喉正常粘膜中的表达及其与临床病理因素之间的关系。1.1免疫组化法：应用S-P二步法检测(1)62例喉鳞癌组织和15例癌旁喉正常粘膜中CTHRC1的蛋白表达情况,细胞浆中阳性表达率分别为79.03%(49/62)和13.33%(2/15),前者明显高于后者,二者统计学上差异具有非常显著性意义(P<0.01),CTHRC1在喉鳞癌组织中的蛋白表达明显高于癌旁喉正常粘膜组织。(2)CTHRC1在喉鳞状细胞癌有无淋巴结转移灶中的表达：CTHRC1在有淋巴结转移灶中的喉癌组织中阳性表达率为92%(23/25),无淋巴结转移中的喉癌组织中阳性表达率为70.27%(26/37),在淋巴结转移组中的阳性表达率显著高于无淋巴结转移组,二者差异在统计学上具有意义(P<0.05)。在喉鳞癌中CTHRC1的蛋白表达与淋巴结转移、临床分期相关(P<0.05),而与临床分型、性别及年龄分组无关(P>0.05)。1.2RT-PCR法：应用RT-PCR法检测20例喉鳞癌组织和20例癌旁喉正常粘膜组织中CTHRC1mRNA的表达情况,喉鳞癌组织的mRNA的平均灰度值为0.93±0.15,而配对正常喉组织中CTHRC1的mRNA的平均灰度值为0.29±0.23,CTHRC1在喉鳞癌组织中的mRNA表达明显高于癌旁喉正常粘膜组织,二者统计学上差异具有非常显著性意义(P<0.01)(图一、二)；在喉鳞癌中CTHRC1mRNA的表达与淋巴结转移(P<0.05)、临床分期(P<0.01)相关,而与临床分型、性别及年龄分组无关(P>0.05)。结论：1在喉鳞癌组织中,CTHRC1呈高表达,提示其可能与喉鳞癌的发生进展相关。2在喉鳞癌组织中,CTHRC1呈高表达与淋巴结转移、临床分期相关而与肿瘤病理学分级、性别及年龄分组无关,其可能与肿瘤的侵润及转移相关。3CTHRC1可能与喉鳞癌发生发展,侵袭、转移相关,有望成为喉鳞癌新的治疗靶点及预后的评估指标。