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实验目的：CD133人源化单链抗体特异性结合肝癌细胞内CD133+细胞，131I能发出β射线，通过131I-CD133mAb对肝癌内CD133+细胞行靶向治疗作用。第一部分检测不同肝癌细胞内CD133的表达实验方法：流式检测仪检测Huh-7细胞和HepG2细胞中CD133的表达，免疫组化检测不同细胞成瘤后瘤体内CD133的表达。在Huh-7细胞和HepG2细胞中，采取免疫磁珠法分选出CD133-细胞和CD133+细胞，并检测分选前后CD133的表达率。用无血清培养基悬浮培养普通Huh-7细胞，流式检测细胞中CD133表达。CD133-细胞和CD133+细胞成瘤实验。实验结果：流式检测仪检测到Huh-7细胞中CD133的表达为79.53%，HepG2细胞中CD133表达为4.33%；Huh-7细胞中CD133的表达较高。免疫组化结果显示：Huh-7细胞内有大量棕黄色颗粒，HepG2细胞内可见部分棕黄色颗粒沉积。相比HepG2细胞，Huh-7细胞体内CD133表达较高，与体外研究结果相符。免疫磁珠分选前后CD133表达率：Huh-7细胞分选前后CD133+表达率分别为74.98%和99.28%；HepG2细胞分选前后CD133+表达率分别为3.73%和95.04%。流式检测仪检测Huh-7悬浮培养细胞中CD133表达为96.39%。在CD133+细胞侵袭试验中，较少CD133+细胞能成瘤，而1×107个CD133-细胞不能成瘤。实验结论：上述实验结果表明，在体内外Huh-7细胞中CD133表达较HepG2细胞高。CD133+细胞侵袭力强，增殖力强，恶性程度高，具有肿瘤干细胞的生物学特性。第二部分131I-CD133mAb联合DDP对肝癌的治疗作用实验方法：采用氯胺-T法制备131I-CD133mAb并鉴定其生物活性；实验设131I-CD133mAb与顺铂（cis-Dichlorodiamineplatinum,DDP）联用组、131I-CD133mAb组、DDP组及空白对照组，MTT法检测各组中不同药物处理对肝癌细胞的生长抑制作用，计算每组药物的IC50值。人肝癌Huh-7细胞移植瘤模型成功构建，随机分为4组，每组实验裸鼠尾静脉给药，连续2周，隔天一次，称量体重，测肿瘤的长径、短径，2次/周。用药结束后颈椎脱臼法处死裸鼠，完整剥离肿瘤组织，比较肿瘤重量，体积、计算抑瘤率；肿瘤组织HE染色，观察肿瘤内部病理学改变。实验结果：131I-CD133mAb抗体标记率为90.25%，放射线化学纯度为97.78%； MTT法检测131I-CD133mAb+DDP组的细胞抑制率及体内抑瘤率明显高于131I-CD133mAb组、DDP组和空白对照组。HE染色后见131I-CD133mAb+DDP组内有大片组织坏死，残余细胞量较少，而其余组可见少量细胞坏死，残存完整细胞较多。实验结果显示131I-CD133mAb能靶向结合CD133+细胞，利用131I释放的β射线对肿瘤干性细胞行靶向治疗。实验结论：131I-CD133mAb标记率较高，131I-CD133mAb+DDP在体内和体外均能有效地抑制高表达CD133抗原的肝癌细胞生长。