【摘 要】
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脂肪肝出血综合征（FLHS）是以禽类肝脏脂质代谢紊乱为特征的代谢性疾病,常见于蛋鸡,是蛋鸡死亡的主要非传染性原因之一,给禽蛋业造成了严重的经济损失。骨钙素（OCN）是成骨细胞特异性分泌蛋白,可调节能量代谢。实验室前期研究提示血液OCN含量与蛋鸡脂肪肝发生具有相关性。因此,推测OCN可能参与蛋鸡FLHS的调控。为了研究OCN对蛋鸡FLHS的调控,本试验将30只68 wk健康白洛克蛋鸡随机分为3个组,
【基金项目】
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国家自然科学基金（No.31702307）； 中央高校基本科研业务费专项资金项目（XDJK2019B013）；
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脂肪肝出血综合征（FLHS）是以禽类肝脏脂质代谢紊乱为特征的代谢性疾病,常见于蛋鸡,是蛋鸡死亡的主要非传染性原因之一,给禽蛋业造成了严重的经济损失。骨钙素（OCN）是成骨细胞特异性分泌蛋白,可调节能量代谢。实验室前期研究提示血液OCN含量与蛋鸡脂肪肝发生具有相关性。因此,推测OCN可能参与蛋鸡FLHS的调控。为了研究OCN对蛋鸡FLHS的调控,本试验将30只68 wk健康白洛克蛋鸡随机分为3个组,每组10只,包括对照组（ND+saline:常规饲料+生理盐水,1次/2 d,i.m.）,高脂饲料组（HFD+saline:高脂饲料+生理盐水,1次/2 d,i.m.）和骨钙素组（HFD+OCN:高脂饲料+重组鸡uc OCN,3μg/只,1次/2 d,i.m.）,持续饲喂40 d。在试验的第1、20和40 d称量蛋鸡体重,第19-20和第39-40 d测量蛋鸡采食量,日常记录蛋鸡产蛋率及合格蛋率。在试验第9-10、19-20、29-30和39-40 d,从各组随机抽取12枚鸡蛋,检测蛋品质、蛋黄粗脂肪和粗蛋白含量。在试验第30 d,进行葡萄糖耐受（OGTT）和胰岛素耐受试验（ITT）。试验第41 d,所有鸡只麻醉,心脏采血后处死。全自动生化仪检测血浆中谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）的含量,ELISA检测血浆胰岛素（Insulin）、脂联素（ADPN）、白介素-1（IL-1）、白介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量。称量腹部脂肪、肝和胰腺重量,五分法评价肝出血情况,索氏抽提法测定肝脂肪含量,HE染色观察胰腺和肝组织结构,Masson三色染色观察肝纤维化情况,透视电镜分析肝细胞超微结构,MDA和GSH-Px试剂盒分析肝脏氧化应激,Real-time PCR检测肝ADPN、PPARα、IL-1、IL-6和TNF-αm RNA的表达,Western-blotting检测肝TNF-α、PPARα、JNK、p-JNK蛋白的表达。试验结果显示,OCN对HFD诱导蛋鸡的体重、采食量、产蛋率及合格蛋率无统计学差异。在第40 d,骨钙素组蛋黄颜色显著性浅于对照组和高脂饲料组,（P<0.05）,且蛋黄粗脂肪含量极显著性低于对照组（P<0.01）。与对照组相比,HFD增加了蛋鸡腹部脂肪含量（P<0.05）,降低了肝脏的相对重量（P<0.05）,但对肝脂肪含量和胰腺重量没有显著性影响（P>0.05）,明显增加了血液ALP含量（P<0.05）,但对AST、TC、TG、LDL-C和HDL-C无显著影响（P>0.05）;高脂饲料组蛋鸡有更严重的肝出血和肝纤维化（P<0.05）,且肝细胞明显固缩,胞内电子高,细胞核固缩,异染色质边集,核周间隙增宽,线粒体重度肿胀,膜破损,线粒体嵴减少、消失,粗面内质网增多,明显扩张、脱颗粒。相对于高脂饲料组,OCN可抵抗HFD引起的肝相对重量降低（P=0.05）,而对HFD蛋鸡血液肝功和血脂指标无显著性影响（P>0.05）,骨钙素组蛋鸡具有更高的胰岛素敏感性,肝脏MDA浓度降低（P<0.05）、GSH-Px含量增加（P<0.05）,血液TNF-α浓度减少（P<0.05）,肝TNF-αm RNA和蛋白表达减少（P<0.05）,且OCN减缓了HFD对蛋鸡肝细胞的损害,肝细胞固缩减缓,自噬溶酶体数量较多,自噬小体增加。与对照组相比,HFD增加了蛋鸡肝脏中p-JNK蛋白表达（P<0.01）和p-JNK/JNK（P<0.05）的比值,而OCN可减少HFD蛋鸡肝脏中JNK蛋白磷酸化。综上所述,高脂饲料（HFD）促进了老龄蛋鸡FLHS的发展进程,而OCN可能通过抑制JNK/p-JNK信号,减轻HFD诱导的肝损伤,减少肝脏出血、纤维化、炎性反应,抑制胰岛素抵抗、氧化应激,激活肝细胞自噬。
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