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烯丙孕素一种人工合成的口服留类促孕激素,有明显的孕激素和抗促性腺激素作用,可抑制排卵。在国外兽医临床实践中,烯丙孕素主要用于母猪、母马的同期发情;而在国内兽医临床实践中,它还未广泛使用,仅初步用于促进母猪同期发情、促进乏情母猪的发情、延迟后备母猪的发情、延迟母猪的分娩时间。本实验通过建立猪可食性组织中烯丙孕素残留量的HPLC-MS/MS检测方法,进而研究烯丙孕素口服液在猪组织中的残留消除规律,为制定国产烯丙孕素口服溶液在猪体内的休药期提供依据。1、建立猪可食性组织中烯丙孕素残留量的HPLC-MS/MS检测方法肝脏和肾脏样品,经β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶酶解,后乙腈提取(肌肉和脂肪样品直接用乙腈提取),乙腈饱和正己烷溶液除脂,氮吹后残渣用乙酸乙酯复溶,后用10%碳酸钠溶液净化进行HPLC-MS/MS分析。提取的样品采用Thermo C18(3×100 mm,1.7 μm)分离,柱温30 ℃;进样量10 μL,流动相为5 mM甲酸铵溶液和乙腈,外标法定量。结果表明:在1-200 μg/kg范围内,烯丙孕素具有良好的线性关系,相关系数大于0.999,方法的检测限为0.5 μg/kg,定量限为1 ug/kg;在1、2、5 μg/kg添加水平下,化合物的平均回收率在60%～110%之间,批内与批间变异系数均小于11%。本实验建立的烯丙孕素提取净化和检测方法适用于猪可食性组织中烯丙孕素残留量的定量分析。2、烯丙孕素口服液在猪体内残留消除研究及休药期的研究20头母猪(平均体重为50 kg)用于残留消除试验。将烯丙孕素口服液按临床推荐剂量(20mg/tou)给猪内服给药,连续18d,停药后分别于6h、1d、5d、10d和18d共5个时间点各随机屠宰组4头猪,采集肌肉、肝脏、肾脏、脂肪(皮下脂肪)样品。采用上述烯丙孕素残留量测定方法测定猪可食性姐织中烯丙孕素残留。结果显示,停药后6 h各组织均达到最高药物浓度,其中肝脏残留最高,平均残留量为259.25 μg/kg,其次依次是肾脏、皮脂、肌肉,平均残留量分别为52.33 μg/kg.49.22μg/kg.25.85 μg/kg;停药1d时,肝脏、肾脏、皮脂和肌肉中烯丙孕素的平均残留量分别降至33.93 μg/kg、11.27 μg/kg、41.95 μg/kg和8.95μg/kg。停药5 d时,4头猪中仅一头猪的肝脏中烯丙孕素的残留量高于MRLs(2 μg/kg),达到2.81 μg/kg;另3头猪中,来自1头猪的肝脏中烯丙孕素的残留量高于定量限,其它组织中烯丙孕素的残留量均低于定量限。停药10 d时,猪所有组织中烯丙孕素的残留量都低于检测限。残留消除试验结果表明,肝脏是烯丙孕素在猪体内残留靶组织。按照欧盟EMEA规定的最高残留限量标准,将停药后各时间点获得的猪各组织中烯丙孕素残留量实测数据采用WT1.4休药期软件计算,得出烯丙孕素在猪肝脏中休药期为8.67天;烯丙孕素在猪皮脂中的休药期依据实测浓度法可暂定为5天。依据烯丙孕素口服液在性成熟后备母猪的可食性组织中残留消除研究结果,建议宁波第二激素厂生产的烯丙孕素口服液按推荐给药方案用药,休药期可暂定为9 d。