背景与目的：乳腺癌是严重威胁女性身心健康的疾病，虽然其新发病例数和死亡病例数呈逐年递增趋势，但是随着人们对乳腺癌认识的逐渐深入和治疗方法的不断优化，死亡率无明显上升。在乳腺癌中,雌激素受体α（ERα）不仅是分子分型的生物标记、内分泌治疗的靶点，也参与到乳腺癌的上皮间质转化（EMT）和侵袭转移的过程，被认为是乳腺癌重要的预后因子。ERα的缺失是三阴性乳腺癌的重要特征之一，此种类型的乳腺癌易于发生复发和转移，缺乏有效的靶向治疗，临床预后较差。乳腺癌中ERα缺失的机制是近年来的研究热点。Slug是具有锌指结构的Snail超家族成员之一，在多种肿瘤中都可以转录抑制E-钙粘素（E-cadherin）的表达，是促进 EMT的重要上游分子。赖氨酸特异性去甲基化酶1（LSD1）是在2004年首先发现的赖氨酸特异性去甲基化酶，当它和不同的转录因子结合后可以影响组蛋白不同位点赖氨酸的甲基化水平，发挥上调或者下调下游靶基因的作用。在本论文中，主要研究了Slug与 Erα的表达关系，Slug调控Erα的机制，Slug/LSD1复合物对Erα的调控作用，以及Slug、LSD1对乳腺癌细胞生物学功能的影响。　　材料和方法：　　1)用免疫组化的方法在50例乳腺癌标本中分析了Slug及Erα的表达情况，然后分析了The Cancer Genome Atlas（TCGA）数据库中Slug及Erα的mRNA和蛋白表达水平，验证免疫组化的结果。同时利用该数据库分析了Slug与临床病理参数的相关性。利用在线网站 http://kmplot.com/analysis/index.php?p=service&cancer=breast分析了 Slug对预后的影响。　　2)利用免疫印迹法、荧光实时定量PCR（RT-PCR）分别研究了在乳腺癌细胞株（MCF-7, T47D, MDA-MB-231, BT549, SKBR3）中Erα及Slug的蛋白和mRNA表达水平；采用免疫印迹法、RT-PCR和免疫荧光实验研究了在Erα阳性乳腺癌细胞株 MCF-7、T47D和 Erα阴性乳腺癌细胞株中 MDA-MB-231、BT549中Slu g对Erα的调控作用。　　3)利用双荧光素酶报告基因实验研究了Slug对ESR1启动子活性的影响。用染色质免疫共沉淀（ChIP）的方法探究了Slug在ESR1启动子的结合情况，进一步用ChIP-荧光定量PCR（qPCR）的方法定量研究在MDA-MB-231及其稳定敲除Slug的细胞株MDA-MB-231shSlug，Slug在ESR1启动子结合情况的变化。　　4)利用免疫印迹法、RT-PCR的方法分别在MCF-7和MDA-MB-231研究了LSD1单独以及Slug和LSD1联合对Erα的调控作用。在HEK293T和 MDA-MB-231细胞中用免疫共沉淀的方法探究了Slug和LSD1的结合情况及Slug的SNAG区域对于此结合的重要性。用ChIP-qPCR研究了在干扰Slug后LSD1在ESR1启动子的结合情况变化。用LSD1的作用底物H3K4me2行组蛋白ChIP-qPCR探究LSD1对Erα组蛋白的甲基化水平的影响。　　5)用划痕愈合实验，细胞增殖，迁移侵袭，平板克隆形成实验探讨了 Slug和LSD1单独及联合对MDA-MB-231生物学功能的影响。　　结果：　　1)在50例乳腺癌标本中，免疫组化结果示Slug与Erα负相关。TCGA数据库示：在mRNA水平，Erα阴性的病人，Slug平均表达水平高；而Erα阳性的病人，Slug平均表达水平低；在蛋白水平，可以得到类似的结论。通过Pearson’s R检验发现两者的相关系数在mRNA水平为-0.1612，在蛋白水平为-0.3403。Slug和年龄、肿瘤大小、淋巴结累及情况、AJCC分期、转移情况、human epidermal growth factor receptor2（HER-2）状态无关，但是和ER、孕激素受体（PR）、分子分型高度相关：Slug高表达组，ER、PR表达水平低，基底型乳腺癌的比例高；Slug低表达组，ER、PR表达水平高，基底型乳腺癌的比例低。通过分析Kaplan-Meierplots生存数据库，发现在总体乳腺癌和Erα阳性亚组乳腺癌中，Slug mRNA水平与无复发生存（RFS），无远处转移生存（DMFS）没有相关性；在Erα阴性亚组乳腺癌中，Slug高表达组的RFS、DMFS低，即易于发生复发和远处转移。　　2)在MCF-7、T47D、MDA-MB-231、BT549、SKBR3乳腺癌细胞中，Slug和ERαmRNA和蛋白表达水平均呈负相关。在 Erα阳性的乳腺癌细胞株MCF-7和 T47D中梯度过表达Slug引起Erα的下调；在Erα阴性的乳腺癌细胞株MDA-MB-231和BT549中干扰 Slug引起Erα的上调。荧光双标显示，在MCF-7和T47D中过表达Slug时，细胞核区域出现代表Slug的红色荧光，而该相应区域代表Erα的绿色荧光减弱；在MDA-MB-231中干扰Slu g时，细胞核区域红色荧光减弱，而该相应区域绿色荧光增强。　　3)双荧光素酶实验显示：在 MDA-MB-231细胞株中，当梯度干扰 Slug时，ESR1 promoter1-luc和ESR1 promoter2-luc的活性逐渐上升，但ESR1 promoter3-luc活性无明显变化；在MCF-7和MCF-7Slug细胞株中可以看到相类似的结果。ChIP结果显示Slug能和ESR1启动子上第1、3、4和6个潜在结合位点结合。　　4)在MCF-7中，单独干扰LSD1，引起Erα的下调，同时过表达Slug和干扰LSD1时，Erα的下调更明显；在 MDA-MB-231中，单独干扰LSD1，引起Erα的上调，同时干扰Slug和LSD1时，Erα的上调更明显。在HEK293T和 MDA-MB-231细胞中，免疫共沉淀显示Slug与LSD1结合形成复合物，且Slug的SNAG区域对于此结合至关重要。ChIP-qPCR显示当干扰Slug时，LSD1在ESR1启动子上的结合会变弱；当干扰LSD1时，ESR1组蛋白的H3K4二甲基化水平会升高。　　5)在MDA-MB-231乳腺癌细胞株中分别干扰Slug，LSD1可引起划痕愈合能力，迁移、侵袭能力，增殖能力，平板克隆形成能力下调，两者同时干扰时有协同抑制作用。　　结论：研究发现了在乳腺癌中全新的Slug调控Erα的机制，Slug通过招募LSD1，结合在ESR1启动子上，促进了其组蛋白的去甲基化，阻碍ESR1的转录；当干扰Slug后，会降低LSD1的招募，上调其组蛋白的甲基化，利于ESR1的转录。