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目的：1.临床研究探讨狼疮性肾炎患者年龄及性别、临床分型、病理类型及活动性指数等的分布情况,比较其中医主证虚、实证之间的上述指标及临床理化相关指标、免疫相关指标、炎症相关指标、尿液相关指标等的差异,以此来分析二者与疾病活动的相关性,为临床虚、实证的判定及分期论治提供客观依据。2.实验研究研究脾肾阳虚型狼疮性肾炎血浆外泌体microRNA表达谱与健康志愿者的差异,对差异表达的分子行靶基因预测及生物通路和基因功能富集分析,找出靶基因的富集功能及调控的信号通路,以探索狼疮性肾炎可能的发生发展机制；筛选出差异表达的microRNA分子,以期能发现具有良好应用前景的可用于辅助诊断的生物标志物；探讨差异表达的microRNA分子与狼疮性肾炎脾肾阳虚证型可能存在的相关性,为中医辨证提供分子生物学方面的客观依据。方法：1.临床研究回顾性调查2010年1月至2015年12月于广州中医药大学第一附属医院肾内科住院的符合诊断标准、纳入标准及排除标准的狼疮性肾炎患者,按照首次肾活检时记录的症状体征,将其分为热毒炽盛证、肝肾阴虚证、气阴两虚证、脾肾气虚证、脾肾阳虚证五型,其中热毒炽盛证纳入实证组,其余四种证型纳入虚证组。收集患者年龄及性别等一般情况、临床分型、病理分型、活动性指数、免疫相关指标及临床相关理化指标等资料,应用SPSS软件进行分析,并比较虚、实证两组患者上述指标的差异。2.实验研究选取脾肾阳虚型狼疮性肾炎患者及健康志愿者各3名,应用Exoquick试剂提取血浆外泌体,采用高通量测序方法测定两组外泌体的microRNA表达谱,筛选出差异表达的microRNA分子行靶基因预测,进一步对预测的靶基因行KEGG Pathway生物通路分析及GO基因功能富集分析,找出靶基因的富集功能及其调控的信号通路。结果：1.临床研究本研究共纳入患者134例,女性患者117例,男性患者仅17例,男女比例约1：6.9。中医主证以脾肾气虚证患者最多,共41例,所占比例约30.6%；其次为热毒炽盛证及脾肾阳虚证,二者均有33例患者,各占24.63%；之后依次为肝肾阴虚证患者14例(10.45%),气阴两虚证患者13例(9.70%)。实证组患者33例,虚证组患者101例。(1)性别、年龄等一般情况：实证组中男性2例,女性31例：年龄最小12岁,最大45岁,平均年龄(27.76±10.80)岁。虚证组中男性15例,女性86例；年龄最小10岁,最大60岁,平均年龄(30.68±12.07)岁。两组患者的年龄、性别比较,差异均无统计学意义。说明狼疮性肾炎患者虚、实证的发病与性别及年龄均无明显相关性。(2)临床分型：临床分型中以肾病综合征为最多见,共59例(44.03%),其次为慢性肾炎型48例(35.82%),之后依次为隐匿性肾炎型12例(8.96%),慢性肾衰竭型11例(8.21%),急进性肾炎型4例(2.98%)。虚、实证两组患者的临床分型分布比较,差异无统计学意义。但实证组患者以慢性肾炎型为最多,而虚证组患者以肾病综合征为最多。急进性肾炎均见于虚证组,且主要为脾肾阳虚证。(3)病理相关指标：病理类型中以Ⅳ型为最多见,共50例(37.31%),其次为V型23例(17.16%),之后依次为Ⅴ+Ⅳ型20例(14.93%),Ⅱ型17例(12.69%),Ⅰ型12例(8.96%),Ⅲ型7例(5.22%),Ⅴ+Ⅲ型3例(2.24%),Ⅵ型2例(1.49%)。虚、实证两组患者的病理类型分布及AI比较,差异无统计学意义；虚证组的CI明显高于实证组,差异有统计学意义。(4)临床理化指标：两组患者的血常规相关指标比较,WBC、LYM、RBC及HGB的差异均有统计学意义。虚证组患者WBC及LYM计数均显著高于实证组,RBC及HGB则显著低于实证组；两组患者的肾功能相关指标比较,BUN、UA及CysC差异均有统计学意义,而Cr水平比较无统计学差异。虚证组患者的BUN、UA及CysC水平均显著高于实证组患者；两组患者的肝功能相关指标比较,AST的差异有统计学意义,而ALT、ALB及G的差异均无统计学意义。虚证组患者的AST水平显著高于实证组。(5)免疫相关指标：所有患者ANA全部为阳性,而ds-DNA阳性患者113例(84.33%)。抗ENA抗体谱中,以抗SSA抗体阳性者为最多,共79例(58.96%)。其次是抗Sm抗体阳性者77例(57.46%),其后为抗核小体抗体(AnuA)阳性者73例(54.48%),之后依次为抗组蛋白抗体(AHA)阳性者58例(43.28%),抗nRNP抗体阳性者42例(31.34%),抗rRNP抗体阳性患者38例(28.36%),抗SSB抗体阳性者34例(25.37%),抗SCL-70抗体阳性者5例(3.73%),抗JO-1抗体阳性者仅1例(0.75%),未发现抗着丝点抗体阳性患者。虚、实证两组患者的各抗体阳性率比较,差异无统计学意义；两组患者自免五项相关指标比较,包括ANA滴度、dsDNA滴度、CIC、C3及C4比较,差异均无统计学意义。(6)炎症指标：部分患者未行CRP及ESR的检测,故实际纳入统计的实证组共20例,虚证组共64例。两组的CRP及ESR比较,差异无统计学意义。(7) SLEDAI积分：在收集的134例患者中,SLEDAI积分最高的为40分,最低的为2分,平均(13.39±0.48)分。病情处于重度活动期的患者62例(46.27%),中度活动期的患者36例(26.86%),轻度活动期患者28例(20.9%),非活动期患者8例(5.97%)。虚、实证两组患者中,各自也均以重度活动期患者为最多见,其次为中度活动期患者,之后依次为轻度活动期、非活动期患者。两组患者的SLEDAI积分及其分期比较,差异均无统计学意义。(8)尿液相关指标：在收集的134例患者中,尿蛋白阳性患者共128例,占95.52%,其中以尿蛋白3+为最多见,共95例(70.9%),尿蛋白阴性患者仅6例；而尿隐血阳性患者共115例,占85.82%,也是以尿隐血3+为最多,共77例患者(57.46%),尿隐血阴性患者仅19例。两组患者的尿蛋白定性、尿隐血及尿蛋白定量比较,差异均无统计学意义。2.实验研究(1)脾肾阳虚型狼疮性肾炎患者与健康志愿者血浆外泌体的microRNA表达谱分析比较,共筛选出148个差异表达的microRNA分子,其中上调表达的131个,而下调表达的仅17个。具有高显著差异的共2个,分别为hsa-miR-127-3p及hsa-miR-4497;一般显著差异的共6个,分别为hsa-miR-129-5p、hsa-miR-383-5p、hsa-miR-423-5p、 hsa-miR-629-3p、hsa-miR-3158-3p及hsa-miR-3184-3p;其余140个均为一般差异。(2)在表达差异显著的8个microRNA分子中,共预测出1664个靶基因,其中hsa-miR-629-3p预测到的靶基因最多,共439个,而hsa-miR-127-3p预测的数量最少,仅8个。Hsa-miR-3158-3p为表达下调的miRNA分子,其预测到的靶基因共205个。(3)靶基因经KEGG生物通路分析,得到具有统计学意义的信号及疾病通路共19个。其中以FoxO信号通路及TGF-β信号通路意义最为显著。(4)靶基因经GO基因功能富集分析,得到具有统计学意义的GO功能共108个。其功能主要体现在细胞自噬及调控基因表达、生物合成、转录因子活性等方面。结论：1.临床研究(1)狼疮性肾炎患者中医主证以脾肾两虚为最多见,包括脾肾气虚证及脾肾阳虚证;临床分型中以。肾病综合征为最多见,其次为慢性肾炎型；病理类型则以Ⅳ型为主,其次为Ⅴ型及Ⅴ+Ⅳ型;病情以重度活动期为主。(2)狼疮性肾炎患者虚、实证的发病与性别及年龄均无明显相关性。(3)实证组与虚证组患者临床分型、病理类型、自免五项、抗ENA抗体谱、SLEDAI积分、炎症指标及尿液相关指标比较,均无明显差异。实证、虚证与疾病活动性并无明显相关。(4)虚证组的CI、WBC、LYM、BUN、UA、CysC及AST等指标显著高于实证组,而RBC及HGB则显著低于实证组。说明虚证组肾肾功能损伤程度及贫血程度均重于实证组,肾脏的慢性损害程度也重于实证组。2.实验研究(1)Hsa-miR-127-3p及hsa-miR-4497两个分子在脾肾阳虚型狼疮性肾炎中表达显著升高,可能对辅助其诊断及辨证具有一定的意义,但需进一步的研究来验证。(2) FoxO信号通路及TGF-β信号通路可能在LN的发病中起着重要作用,细胞自噬及调控基因表达、生物合成、转录因子活性功能等异常可能是LN重要的发病机制,均需进一步的研究证实。