基于磁分选技术与光谱技术对于肿瘤细胞的分离及检测

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纳米材料因具有特殊的的化学性质和物理性质因而广泛被用于物质检测及生物应用领域等方面。在物质检测方面,纳米技术具有较高的灵敏度和高效性。循环肿瘤细胞(CTC)是存在于外周血中少量的恶性肿瘤细胞,这些肿瘤会通过血液转移至其他器官,而肿瘤的转移是造成患者死亡的主要原因。在早期诊断阶段,循环肿瘤细胞的诊断可有助于鉴别良性和恶性肿瘤,转移风险等预测及评估。因此循环肿瘤细胞的早期诊断及治疗,对于患者预后判断、疗效评价及个体化治疗都具有十分重要的意义。免疫磁珠分离技术是结合免疫学的高度特异性与磁珠的磁响应性的一项免疫学技术。本论文致力于利用合成的纳米材料通过磁分选技术检测及分离循环肿瘤细胞。本论文所用的免疫磁珠具有极小粒径,较好的磁强度以及良好的特异性等特性,以及所制备的拉曼纳米粒子具有粒径小,分散均匀,特异性强,具有将强的拉曼信号等优势,结合荧光技术及表面增强拉曼技术等,建立了性能良好的捕获及分选检测循环肿瘤细胞方法。本论文主要研究工作如下:1.基于磁性免疫磁珠对循环肿瘤细胞的富集及检测。本章基于磁分选技术在肿瘤细胞分选方面的发展和应用,利用特异性抗体与细胞表面特异性抗原相结合,使得循环肿瘤细胞和特异性的免疫磁珠特异性结合,从而在外界磁场的作用下,使得目的细胞在磁场的作用下从混合细胞中分离出来。分离出的细胞由间接荧光技术在其细胞表面连接结合PE荧光团的特异性抗体,并用DAPI染色细胞核定位细胞位置。通过倒置荧光显微镜的观察,从而实现了对肿瘤细胞的定量检测。本章所选用的目的细胞为肺癌A549细胞,对照细胞为MRC-5细胞。依据实验结果显示检测下限可达到每毫升三个A549细胞,具有较好的灵敏度和检测下限。本实验是利用磁分选技术及间接免疫荧光技术双功能检测及分离肺癌循环肿瘤细胞。2.基于磁分离技术和表面增强拉曼技术捕获及检测Hela细胞。本章基于磁分选作用对肿瘤细胞的特异性的分选及检测,将目的细胞从混合细胞中分选出来,同时制备了一种可特异性连接到目的细胞表面的纳米粒子AuNPs-MBA-BSA-FA,依据实验表征结果显示该粒子具有粒径小,分散均匀,特异性强,具有较强的拉曼信号等优势,结合表面增强拉曼技术根据拉曼信号强度来计数细胞数目,从而实现了对肿瘤细胞的定量检测。本实验所选用的目的细胞为子宫颈癌Hela细胞,对照细胞为MRC-5细胞。实验结果显示检测下限达到每毫升六个Hela细胞。本实验是利用磁分选技术及表面增强拉曼技术双功能检测及分离子宫颈癌肿瘤细胞。
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