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第一部分乳腺浸润癌中CD19+调节性B细胞的确定及其生物学意义目的:研究乳腺肿瘤组织中Bregs表达情况及其与乳腺浸润性癌的相关性和临床意义。方法:本研究利用免疫组化技术分析CD19、IL-10在134例乳腺浸润性癌组织中的表达情况,免疫荧光技术研究两者之间的相互关系以及流式细胞检测技术研究乳腺肿瘤组织中CD19+IL-10+B细胞表达并与CD24、CD38之间的相互关系。结果:(1):乳腺浸润性癌中IL-10主要定位于肿瘤周围浸润的淋巴细胞的细胞浆,表达与肿瘤分化程度相关,即低分化肿瘤组织高表达IL-10分子(P=0.048),IL-10的阳性表达在ER-、PR-、HER2+组中表达增高,相对于ER+、PR+以及HER2-组差异具有统计学意义(P=0.02,P=0.049,P=0.049)。(2):乳腺肿瘤周围浸润CD19+B细胞与IL-10存在共表达(P=0.001),部分CD19+细胞胞浆内可见IL-10颗粒,表明乳腺癌肿瘤周围浸润CD19+B细胞可能具有分泌IL-10能力。(3):乳腺浸润性癌外周血CD19+IL-10+的比例比纤维瘤中增高(P=0.046),且高表达CD24、CD38分子,同时CD19+CD24+CD38+中B细胞IL-10+B细胞表达比非CD19+CD24+CD38+B增高。(4):乳腺浸润性癌组织中CD19+B、CD19+CD24+CD38+Bregs细胞的表达相较纤维瘤中增高。结论:本研究证实在乳腺浸润性癌病人外周血及其肿瘤组织中CD19+IL-10+的B细胞的比例较高,且其表面标志为CD24、CD38。为深入研究B细胞亚群与乳腺浸润癌细胞之间的相关性,以及与肿瘤免疫的相关性奠定基础。第二部分CD19+CD24+CD38+调节性B细胞与调节性T细胞的相互关系及其生物学意义目的:检测Bregs、Tregs在乳腺肿瘤患者中的表达情况,探讨两者之间的相互关系及其生物学意义。方法:利用流式细胞技术检测健康人、纤维瘤以及乳腺浸润性癌中Bregs、Tregs表达情况,与临床病理参数之间的关系及其两者之间的相互关系。结果:(1):乳腺浸润性癌病人外周血中CD19+B不仅能够提高乳腺浸润性癌病人T细胞中Tregs的比例,同样促进健康人的CD4+T细胞向Tregs分化。(2):乳腺浸润性癌外周血的中Bregs的比例增高,与健康人(P<0.001)和纤维瘤(P<0.001)相比具有显著差异,CD19+B细胞在肿瘤直径小于3cm组中表达增高,与直径大于3cm组差异具有统计学意义(P=0.019),而与其他临床病理参数均无统计学意义。(3):乳腺浸润性癌外周血中Tregs的比例表达增高,与健康人(P<0.001)、纤维瘤(P<0.001)相比,存在显著统计学意义。同时CD4+T细胞在年龄小于49岁组中表达增高,与年龄大于49岁组相比,差异具有统计学意义(P=0.047),而与其他临床病理参数均无统计学意义。(4):乳腺浸润性癌外周血中,B细胞与T细胞之间的相互关系(P≤0.001,r=0.397),同时Bregs与Tregs之间表达也存在显著正相关性(P=0.001,r=0.361)结论:乳腺浸润性癌患者外周血表达高水平的Bregs、Tregs且存在正相关性,肿瘤细胞如何通过Bregs、Tregs发挥免疫逃避的机制仍需进一步研究。第三部分PD-L1分子对CD19+CD24+CD38+调节性B细胞的调节以及生物学意义目的:通过对乳腺癌细胞株表面所表达PD-L1分子来研究肿瘤细胞对Bregs的作用以及功能的影响,为针对肿瘤细胞表达的PD-L1分子治疗新的策略提供新的依据。方法:将活化刺激的CD19+B细胞、分别与MCF-7,MDA-MB-231乳腺癌细胞株共育培养,流式细胞仪检测Bregs的表达,再与CD4+T细胞共育培养检测Tregs的表达。Si RNA下调MDA-MB-231细胞上PD-L1,与CD19+B,CD4+T细胞共育培养,流式细胞仪检测Bregs,Tregs的表达情况结果:(1):肿瘤细胞株表面所表达的PD-L1分子可诱导CD19+Bregs的扩增,进而促进CD4+的T细胞分化为Tregs。(2):Si RNA干扰下调PD-L1分子的表达后,Bregs及Tregs的数量也随之下降。结论:肿瘤细胞所表达PD-L1可诱导CD19+B细胞向Bregs分化,进而抑制机体的免疫应答,从而逃避宿主免疫攻击;这也为针对PD-L1分子的肿瘤免疫治疗提供依据。