普通菜豆14-3-3蛋白基因家族的鉴定及在干旱胁迫中的功能分析

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普通菜豆是一种重要的蔬菜作物,味道鲜美,营养丰富,在世界各地均有栽培。然而菜豆在生长和发育阶段会受到各种各样环境因素的影响,如:干旱、低温和土壤盐渍化及病害等,这给菜豆的生产造成了巨大损失。在普通菜豆的生产实践中,干旱是主要的限制因素之一,挖掘关键的干旱调控因子对于提高普通菜豆的抗旱性具有重要意义。14-3-3蛋白是植物响应胁迫的重要调控因子,然而目前在普通菜豆中未见它们调控干旱胁迫应答的报道。本研究在实验室前期克隆工作的基础上,对普通菜豆中的9个14-3-3蛋白基因进行了鉴定,分析了这些14-3-3蛋白基因组织表达特异性、干旱胁迫表达模式,进一步对干旱胁迫下表达模式变化较大的PvGF14a基因进行了启动子的克隆与分析,并对PvGF14a转基因植株的抗旱性进行了初步分析,主要研究结果如下:1.实验室前期通过普通菜豆基因组数据库的查询,发现了9个普通菜豆14-3-3蛋白基因,并对其中8个进行了克隆。在本研究中我们通过生物信息学的方法分析了它们的蛋白特性、亚细胞定位、基因结构以及与其它植物14-3-3蛋白的同源性和进化关系,发现它们与大豆中的同源性最高,并且根据大豆中14-3-3蛋白的命名方法将这9个基因命名为:PvGF14a,PvGF14b,PvGF14c,PvGF14d,PvGF14e,PvGF14g,PvGF14h,PvGF14n,PvGF14q;其亚细胞定位在细胞质、过氧化物酶体、叶绿体、线粒体中;通过分析普通菜豆中14-3-3蛋白基因结构特征发现被划分在同一组的14-3-3蛋白的外显子和内含子大小相似。2.根据从phytozome网站上下载的普通菜豆14-3-3蛋白基因表达数据,并构建热图分析,我们发现14-3-3蛋白基因在普通菜豆中的表达具有组织特异性,其中PvGF14a在菜豆各组织中表达量最高。实时定量PCR结果表明普通菜豆14-3-3蛋白基因响应干旱胁迫的表达模式不同,其中PvGF14n、PvGF14c、PvGF14a基因的表达水平呈现上升趋势;PvGF14e、PvGF14g、PvGF14h基因的表达水平呈现下降趋势;PvGF14d和PvGF14b表达水平变化不明显;其中PvGF14a在干旱胁迫下表达模式变化最大。3.克隆了PvGF14a启动子区域1394bp,并构建到GUS报告基因载体中,发现GUS报告基因在拟南芥幼苗、茎、花等各个器官中均有高表达。4.我们通过拟南芥和番茄转化获得了PvGF14a异源表达的转基因植株,甘露醇模拟干旱胁迫和土壤干旱胁迫后发现PvGF14a转基因植株干旱抗性降低,表明PvGF14a可能在干旱胁迫中起负向调控作用。这些研究结果为进一步利用分子遗传学等手段改良菜豆品种奠定了基础。
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