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目的:研究缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia induced mitogenic factor,HIMF)作为细胞外钙敏感受体的(extracellular calcium-sensing receptor,CaSR)的非经典配体在慢性缺氧诱导的肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)的增殖和肺动脉高压中的作用和机制。方法:(1)通过免疫沉淀技术筛选出在慢性缺氧性肺动脉高压中和HIMF相互作用的G蛋白偶联受体;(2)原代培养PASMCs;(3)免疫共沉淀技术和免疫荧光技术检测HIMF和CaSR的相互作用和共定位情况;(4)酵母双杂交技术筛选出和HIMF主要作用的CaSR氨基酸位点;(5)用不同的细胞外钙离子浓度([Ca2+]o)处理PASMCs后用钙离子荧光探针Fura-2/AM和钙离子荧光成像系统检测胞浆内钙离子浓度([Ca2+]i);(6)PASMCs转染CaSR shRNA和CaSR突变质粒(突变CaSR和HIMF特异性结合的四个氨基酸位点的质粒)下调和突变CaSR的表达,PASMCs转染HIMF shRNA和HIMF过表达质粒下调和上调HIMF的表达;(7)合成特异性的穿膜肽竞争HIMF和CaSR的结合位点,阻止HIMF和CaSR的结合;(8)用CCK8试剂盒检测PASMCs增殖的情况;(9)Calhex231和特异性穿膜肽注射SD大鼠和慢病毒感染SD大鼠;(10)western和ELLISA检测慢病毒效应;(11)power lab检测肺动脉压、体循环压和心输出量;(12)western检测HIMF和CaSR的结合是否影响CaSR二聚体的形成;(13)通过钙成像技术检测抑制HIMF和CaSR相互作用的特异性多肽在正常的条件下是否对CaSR的正常功能有影响。结果:(1)免疫共沉淀技术筛选出在缺氧性肺动脉高压中HIMF是通过CaSR这个G蛋白偶联受体起的作用;(2)免疫共沉淀技术和免疫荧光技术检测HIMF和CaSR在原代培养的PASMCs和缺氧后SD大鼠的肺动脉中(PA)可以相互结合且存在共定位;(3)酵母双杂交技术筛选出和HIMF主要作用的CaSR氨基酸位点是位于CaSR胞内段885-888aa这4个氨基酸;(4)慢性缺氧可以导致CaSR敏感性增加和PASMCs的增殖,这个效应台能被CaSR的特异性抑制剂Calhex231、CaSR shRNA、CaSR mutation、特异性穿膜肽和HIMF shRNA抑制;(5)常氧情况下过表达HIMF可以导致CaSR敏感性增加和PASMCs的增殖,这个效应能被CaSR的特异性抑制剂Calhex231和CaSR shRNA抑制;(6)将包装CaSR和HIMF干扰的特异性质粒、CaSR突变质粒和HIMF过表达质粒的慢病毒气道注入SD大鼠72小时候后开始造动物模型,活体实验中,慢性缺氧可以引起SD大鼠肺动脉压力、肺循环阻力、右心肥厚指数和肺动脉中层平滑肌厚度的增加,这个效应能被CaSR的特异性抑制剂Calhex231、CaSR shRNA、CaSR突变、HIMF shRNA和特异性穿膜肽抑制;(7)常氧情况下过表达HIMF可以导致SD大鼠肺动脉压力、肺循环阻力、右心肥厚指数和肺动脉中层平滑肌厚度的增加,这个效应也能被CaSR的特异性抑制剂Calhex231和CaSR shRNA抑制;(8)ELISA检测HIMF shRNA慢病毒干扰了 HIMF的表达和HIMF过表达慢病毒使常氧时HIMF基因的表达增加,western检测转染CaSR shRNA时CaSR表达减少和转染CaSR突变质粒时CaSR表达增加;(9)HIMF和CaSR的结合通过影响CaSR的二聚体的形成而使得CaSR敏感性增高;(10)在正常的条件下,特异性穿膜肽只是阻碍CaSR和HIMF相互作用,并不影响CaSR其本身的生理功能。结论:慢性缺氧诱导HIMF表达的增加后使得HIMF和CaSR结合增加,这促进了 CaSR二聚体形成的增加,进而增强PASMCs上CaSR的敏感性,使其更容易被[Ca2+]o激活,[Ca2+]o内流导致[Ca2+]i的增加和PASMCs的增殖而引起肺动脉高压。