论文部分内容阅读
[目的]探讨三氧化二砷(As203)单药和与地西他滨(DAC)联用对急性髓系白血病(AML)细胞株HL-60细胞的作用及可能的机制,旨在为AML临床用药提供理论依据。[方法]通过细胞培养的方法对AML细胞株HL-60细胞进行传代培养,用不同浓度的As203单药和与DAC联用作用HL-60细胞24h、48h和72h；应用MTT比色法检测经不同浓度As203单药和与DAC作用不同时间后对HL-60细胞增殖抑制作用；Annexin V-FITC/PI双染法及PI单染法流式细胞仪分别检测As203单药和与DAC联用对HL-60细胞凋亡及周期的影响；实时荧光定量RT-PCR检测经As203单药和与DAC联用对HL-60细胞ID4、P15、DNMT-1、DNMT-3A、DNMT-3B mRNA表达的作用。[结果]1、MTT结果显示：不同浓度As203单药和与DAC联用作用不同时间对HL-60细胞均有一定的增殖抑制作用,并有明显的量效和时效关系；As203单药12umol/1作用72h时抑制作用最明显,抑制率为78.92%+2.17%；As203与DAC联用可以协同增加增殖抑制效率,当As2O3+DAC浓度为6umol/1+5umol/1作用72h对HL-60细胞的增殖抑制作用最明显,可达74.04%±1.2%,明显比As203单药6umol/1作用72小时高,P<0.05；2. Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡结果显示：As203对HL-60细胞株有明显的促凋亡坏死作用,并有明显的量效和时效性,且随着药物浓度和作用时间的增加,坏死细胞逐渐增加；As203与DAC联用可协同增加对HL-60细胞的促凋亡作用,同样具时效和量效关系；但是两药联用对HL-60细胞的促坏死作用不明显,P>0.05；3、PI单染法流式细胞仪结果显示：As203主要阻滞HL-60细胞于G1/G0期,有量效和时效关系；而As203与DAC联用对细胞周期有影响,但无显著规律。4、RT-PCR显示：ID4和P15基因mRNA在HL-60细胞中呈低表达,As203单药和与DAC合用后其表达恢复,随着药物浓度和作用时间的增加,表达量逐渐增加；与此同时,在HL-60高表达的DNMT-1、DNMT-3A、DNMT-3B经两药作用后表达量逐渐降低；As203与DAC联用有协同增加ID4和P15基因mRNA表达,并协同降低DNMT-1、DNMT-3A、DNMT-3B基因mRNA表达。[结论]1、As203单药具有抑制HL-60细胞增殖、促进细胞凋亡坏死、阻滞细胞于G0/G1周期的作用,并有量效和时效关系；2、As203与DAC联用能协同增加对HL-60细胞增殖抑制作用、促进细胞凋亡的作用,两药联用对HL-60细胞的细胞周期有影响,但无显著作用规律；3、As203与DAC联用可协同增加抑癌基因ID4和P15mRNA表达量,其机制可能通过抑制甲基化转移酶DNMT-1、DNMT-3A、DNMT-3B的活性,降低了ID4和P15基因的甲基化水平相关。