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目的：
Amelogenin基因是编码牙釉质蛋白的基因，其序列同时存在于X和Y染色体上，同源基因为AMEL-X、AMEL-Y。通过设计引物进行扩增可得到长度不同的X和Y的PCR产物，女性的扩增产物电泳后为106bp的单条带，男性则有2条，长度分别为106和112bp，这样的单带与双带的差异在法医物证中用于性别鉴定。Amelogenin基因座包含于几乎所有的常染色体STR分型试剂盒中，在亲子鉴定、个人识别和DNA数据库建设中应用广泛。但Amelogenin基因发生变异可导致AMEL-X或AMEL-Y的扩增产物条带不出现。我们发现，Amelogenin基因丢失的现象时有发生，当AMEL-Y丢失可导致性别判断错误而误导侦查方向，AMEL-X丢失不会导致性别判断出现错误，但会改变X与Y的峰值比率，从而影响男女混合样本混合比例的判读。本文在此对Amelogenin基因丢失的现状和原因进行分析，通过实际案例介绍其对案件的影响及解决方法，探索其丢失机制并提出应对策略。
材料与方法：
1.选择三个案例，用血液采集卡提取被检测人尹某(案例一)、谢某、谢某某(案例二)、程某(案例三)指尖血制成1.5cm2血痕，常温干燥保存。
2.采用磁珠法和Chelex-100法提取DNA。
3.利用德国QIAGEN公司的M48磁珠试剂盒，以磁珠法按照说明书提取案例一中尹某血样的DNA，采用PowerPlex?21试剂盒、GlobalFilerTM试剂盒、AmpFlSTR?Identifiler?试剂盒、华夏TM白金试剂盒、Yfiler?Pluskit试剂盒对各基因座进行扩增，在GeneAmp?9700扩增仪上进行扩增反应，在3500xl遗传分析仪进行毛细管电泳，由GeneMapperID-X软件完成基因型分型。用Chelex-100法提取案例二中谢某、谢某某血样DNA，采用MicroreaderTM21DirectIDSystem试剂盒得出常染色体基因座等位基因分型，并使用MicroreaderTMYPrimePlusDirectIDSystem试剂盒得出Y-STR分型结果。采用Chelex-100法提取案例三中程某血样DNA，以PowerPlex?21试剂盒和MicroreaderTM21DirectIDSystem试剂盒得到常染色体基因座分型结果。
4.分析Amelogenin丢失的机制，总结Amelogenin基因丢失的应对策略。
结果：
案例一中尹某血样的PowerPlex?21System，AmpFlSTR?Identifiler?PlusKit、GlobalFilerTM试剂盒和华夏TM白金试剂盒检测结果均显示AMEL-Y缺失，但Yfiler?PlusKit试剂盒检测得到多个Y-STR的分型结果。案例二中谢某和谢某某的MicroreaderTM21DirectIDSystem试剂盒检测结果显示，存在AMEL-Y丢失，但使用MicroreaderTMYPrimePlusDirectIDSystem试剂盒则能得到Y-STR分型结果，同时显示出二人的Y染色体存在多片段的缺失，且缺失的等位基因一致。案例三中程某在用PowerPlex?21System时存在AMEL-X丢失，采用MicroreaderTM21DirectIDSystem试剂盒后能够重新检出AMEL-X。
结论：
Amelogenin基因变异的机制主要有Amelogenin引物结合区突变和包含Amelogenin基因在内的染色体微缺失。本实验中的两个AMEL-Y丢失的案例发生机制均为Y染色体上的小片段缺失，且这种缺失情况可遗传至子代。怀疑Amelogenin等位基因丢失时，可更换试剂盒进行检测。在怀疑AMEL-Y丢失时用Yfiler?PlusKit试剂盒能够更直接地进行Y染色体STR基因座检测，从而做出正确的性别判定。AMEL-X丢失的机制可为Amelogenin引物结合区突变，通过更换试剂盒可克服因AMEL-X丢失而产生的错误判断。AMEL-Y丢失会发生性别误判，当需进行性别判断时，不应以AMEL基因座的分型结果作为唯一标准，必须进行Y-STR以确保性别判断的准确性。
Amelogenin基因是编码牙釉质蛋白的基因，其序列同时存在于X和Y染色体上，同源基因为AMEL-X、AMEL-Y。通过设计引物进行扩增可得到长度不同的X和Y的PCR产物，女性的扩增产物电泳后为106bp的单条带，男性则有2条，长度分别为106和112bp，这样的单带与双带的差异在法医物证中用于性别鉴定。Amelogenin基因座包含于几乎所有的常染色体STR分型试剂盒中，在亲子鉴定、个人识别和DNA数据库建设中应用广泛。但Amelogenin基因发生变异可导致AMEL-X或AMEL-Y的扩增产物条带不出现。我们发现，Amelogenin基因丢失的现象时有发生，当AMEL-Y丢失可导致性别判断错误而误导侦查方向，AMEL-X丢失不会导致性别判断出现错误，但会改变X与Y的峰值比率，从而影响男女混合样本混合比例的判读。本文在此对Amelogenin基因丢失的现状和原因进行分析，通过实际案例介绍其对案件的影响及解决方法，探索其丢失机制并提出应对策略。
材料与方法：
1.选择三个案例，用血液采集卡提取被检测人尹某(案例一)、谢某、谢某某(案例二)、程某(案例三)指尖血制成1.5cm2血痕，常温干燥保存。
2.采用磁珠法和Chelex-100法提取DNA。
3.利用德国QIAGEN公司的M48磁珠试剂盒，以磁珠法按照说明书提取案例一中尹某血样的DNA，采用PowerPlex?21试剂盒、GlobalFilerTM试剂盒、AmpFlSTR?Identifiler?试剂盒、华夏TM白金试剂盒、Yfiler?Pluskit试剂盒对各基因座进行扩增，在GeneAmp?9700扩增仪上进行扩增反应，在3500xl遗传分析仪进行毛细管电泳，由GeneMapperID-X软件完成基因型分型。用Chelex-100法提取案例二中谢某、谢某某血样DNA，采用MicroreaderTM21DirectIDSystem试剂盒得出常染色体基因座等位基因分型，并使用MicroreaderTMYPrimePlusDirectIDSystem试剂盒得出Y-STR分型结果。采用Chelex-100法提取案例三中程某血样DNA，以PowerPlex?21试剂盒和MicroreaderTM21DirectIDSystem试剂盒得到常染色体基因座分型结果。
4.分析Amelogenin丢失的机制，总结Amelogenin基因丢失的应对策略。
结果：
案例一中尹某血样的PowerPlex?21System，AmpFlSTR?Identifiler?PlusKit、GlobalFilerTM试剂盒和华夏TM白金试剂盒检测结果均显示AMEL-Y缺失，但Yfiler?PlusKit试剂盒检测得到多个Y-STR的分型结果。案例二中谢某和谢某某的MicroreaderTM21DirectIDSystem试剂盒检测结果显示，存在AMEL-Y丢失，但使用MicroreaderTMYPrimePlusDirectIDSystem试剂盒则能得到Y-STR分型结果，同时显示出二人的Y染色体存在多片段的缺失，且缺失的等位基因一致。案例三中程某在用PowerPlex?21System时存在AMEL-X丢失，采用MicroreaderTM21DirectIDSystem试剂盒后能够重新检出AMEL-X。
结论：
Amelogenin基因变异的机制主要有Amelogenin引物结合区突变和包含Amelogenin基因在内的染色体微缺失。本实验中的两个AMEL-Y丢失的案例发生机制均为Y染色体上的小片段缺失，且这种缺失情况可遗传至子代。怀疑Amelogenin等位基因丢失时，可更换试剂盒进行检测。在怀疑AMEL-Y丢失时用Yfiler?PlusKit试剂盒能够更直接地进行Y染色体STR基因座检测，从而做出正确的性别判定。AMEL-X丢失的机制可为Amelogenin引物结合区突变，通过更换试剂盒可克服因AMEL-X丢失而产生的错误判断。AMEL-Y丢失会发生性别误判，当需进行性别判断时，不应以AMEL基因座的分型结果作为唯一标准，必须进行Y-STR以确保性别判断的准确性。