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目的1.探讨急性羰基镍对大鼠血液、肺组织、肝组织和肾组织基因组DNA分子的加合作用,为临床急救和防护提供科学依据。2.研究急性羰基镍中毒对大鼠肺组织和肝组织中损伤修复相关基因细胞周期检测点激酶1(Chk1)和细胞分裂周期蛋白25A(Cdc25A)基因mRNA的表达,从分子水平研究其中毒修复机制。方法1.采用紫外吸收光谱移动法对四组染毒剂量组(A、B、C组为羰基镍组,D组为氯气组)以及正常对照组(E组)的SD大鼠的血液、肺组织、肝组织以及肾组织中所提取的DNA在250nm-275nm波长下进行OD值的测定,求其平均值并绘图比较最高吸收峰的左右位移,得出结论。2.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对四组染毒剂量组(A、B、C组为羰基镍组,D组为氯气组)以及正常对照组(E组)的SD大鼠的肺组织和肝组织标本进行Chk1和Cdc25A基因表达的分析,初步分析羰基镍中毒的分子修复机制。结果1.血液中各染毒组在染毒1d、2d、3d和7d后与正常对照组比较,均有最高吸收峰的位移,且都右偏移+1nm。而肺、肝、肾组织中未见明显左右位移。2、随着染毒天数的增加肺、肝和肾组织中的最大吸光度大都呈先下降后上升的趋势,且在染毒3d后最低;D组的最大吸光度低于其他各组。3.肺组织中Chk1基因mRNA表达的强度、面积、平均密度与羰基镍的染毒剂量呈正的直线相关。强度与剂量的直线方程为Y=116.189+0.235X(r~2=0.671;F=20.403,p=0.001;X系数:t_β=4.517,p=0.001),面积与剂量的直线方程为Y=1185.788+2.779X(r~2=0.641;F=17.829,p=0.002;X系数:t_β=4.222,p=0.002),平均密度与剂量的直线方程为Y=115.691+0.204X(r~2=0.866;F=64.371,p=0.000;X系数:t_β=8.023,p=0.000);其中Chk1基因mRNA表达的平均密度与染毒剂量的直线方程拟合效果最好。4.肺组织中Cdc25A基因mRNA表达的强度、面积、平均密度与羰基镍的染毒剂量呈正的直线相关。强度与剂量的直线方程为Y=132.813+0.238X(r~2=0.551;F=12.274,p=0.006;X系数:t_β=3.503,p=0.006),面积与剂量的直线方程为Y=1112.168+3.386X(r~2=0.765;F=32.610,p=0.000;X系数:t_β=5.710,p=0.000),平均密度与剂量的直线方程为Y=139.995+0.198X(r~2=0.448;F=8.100,p=0.017;X系数:t_β=2.846,p=0.017);其中Cdc25A基因mRNA表达的面积与染毒剂量的直线方程拟合效果最好。5.肝组织中Chk1和Cdc25A基因mRNA表达的强度、面积、平均密度、标准量与羰基镍的染毒剂量和取材的时间之间均未发现相关关系(p＞0.05)。结论1.羰基镍和氯气在血液中与DNA分子有加合作用,在肺组织、肝组织和肾组织中与DNA分子的加合作用很弱。2.羰基镍急性中毒3d各组织中的DNA吸光度最低,提示DNA损伤最大,此后DNA吸光度逐渐升高,提示DNA逐渐修复。3.肝组织中D组的最大吸光度明显低于其他各组,提示氯气与羰基镍的中毒机制存在差异。4.大鼠肺组织中Chk1和Cdc25A基因表达量与羰基镍急性中毒剂量间存在明显的相关,提示Chk1和Cdc25A基因在羰基镍急性中毒细胞DNA损伤修复和周期调控中发挥重要作用。5.大鼠肝组织中Chk1和Cdc25A基因表达量与羰基镍急性中毒剂量间未发现明显的相关。