目的意义：HPPCn(Hepatopoietin Cn)是在我们实验室一种新发现的再生肝脏的细胞生长因子，哺乳动物为其主要来源，在多种组织中广泛表达。作为一类多功能的核蛋白，它可以表达于肿瘤组织中，同时也表达于自我具有更新能力的细胞中和正常组织中，同时在很多方面发挥了重要的作用，其中包括在蛋白质的降解、细胞骨架动力学、细胞之间的信号转导、和细胞的形态变化方面和其他许多生物过程。在CRCC细胞中HIF-1α和HIF-2α的转录靶基因并不完全相同，并清楚定义了HIF-1α和HIF-2α的特异靶基因。多种癌基因如CyclinD1、TGF-α、VEGF等是HIF-2α的特异靶基因，而促凋亡基因BNIP3是HIF-1α的特异靶基因。而且HIF-1α和HIF-2α与不同的信号转导通路交联。激活的HIF-1α能够降低c-Myc依赖的细胞增殖，而HIF-2α则与之相反。除此以外，HIF-1α比HIF-2α对VHL缺失CRCC细胞中蛋白酶体的降解更敏感。CRCC的多血管特征常与HIF-2α上调密切相关，而CRCC中高表达HIF-1α患者的生存期要长于其他类型患者。因此，HIF，特别是HIF-2α可能在CRCC发展中发挥了更为重要的作用近年来的研究发现HPPCn的表达和活性与肿瘤的生长与预后密切相关。HPPCn能够抑制多种化疗药物（Sorafinib，ADM，CDD，TSA）诱导的肝癌细胞凋亡，并经过调控mRNA的表达促进肿瘤细胞上皮-间质转化（EMT）和血管内皮细胞迁移，促进肿瘤的转移和浸润。转基因小鼠的肝癌诱发实验显示HPPCn能够在诱导早期增加原癌基因c-myc的表达，并显著增加肿瘤的肺转移率。肝癌细胞尾静脉注射实验显示HPPCn高表达能够增加肝癌细胞的肺转移和肿瘤中血管的数量。同时，初步的研究还发现HPPCn在肾脏透明细胞癌中的表达明显高于癌旁组织和正常肾脏组织。并且发现HPPCn可促进HIF-2的表达。那么，肾脏透明细胞癌的发生、发展过程中与HPPCn之间会有着什么样的关系呢？HIF-2又在这之中是否有作用？围绕上述问题，本实验目的是研究HPPCn调控HIF-2a促进肾癌细胞生长转移的作用和机制。为此做了如下的研究工作。方法:构建干涉HIF-2的慢病毒载体，应用Western blot和Q-PCR检测HIF-2的干涉效率。再通过干涉肿瘤细胞的HIF-2表达，应用MTS，划痕实验、Transwell实验验证HIF-2在HPPCn调控肾癌细胞发生发展中的作用。结果:我们通过慢病毒载体构建技术构建了PLKO.1-shHIF-2，并将其包装成慢病毒，它可以有效的干涉细胞内的HIF-2的表达，干涉效率在蛋白质水平和mRNA水平上均大于80%，病毒感染细胞后经过克隆扩大培养，获得了稳定干涉HIF-2的786-0细胞，慢病毒的获取和稳定细胞的筛选为下一步阐述HPPCn在肾脏透明细胞癌中的作用奠定了基础。随后，我们验证了HPPCn蛋白通过对肾脏透明细胞癌中HIF-2的调控进而影响肾透明细胞癌细胞生物特性。我们用稳定干涉HIF-2的786-0细胞来进行实验，证明干涉786-0细胞内HIF-2表达后，HPPCn蛋白对细胞的增殖能力，迁移能力，细胞的凋亡率都消失。基于以上的研究，我们得出结论HPPCn在肾脏透明细胞癌的生物特性方面有重要的作用，HPPCn是通过对HIF-2的调节来促进肿瘤细胞的增殖，迁移、活化和转移等生物过程，该研究将为肾脏透明细胞癌的分子靶向治疗提供新的理论支持。