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背景和意义神经母细胞瘤细胞(SHSY5Y)是神经系统疾病研究中重要的细胞系,该细胞表达神经营养因子。本实验制备的SHSY5Y提取液是此细胞内的蛋白,对中枢和外周神经系统有营养作用。干细胞疗法是研究组织修复的重要方法。脐带间充质干细胞(UC-MSCs)是一类具有多向分化潜能和自我更新能力的细胞群。UC-MSCs可分泌细胞因子,如神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)等,在神经损伤后的修复过程中发挥重要作用。研究表明增加损伤部位神经营养因子可促进神经修复。本实验用SHSY5Y提取液处理UC-MSCs,检测处理后细胞分泌NGF和BDNF的变化,观察处理后的干细胞对坐骨神经损伤的促修复作用,为周围神经损伤修复提供一种有益的思路。材料与方法应用超声破碎法得到SHSY5Y提取液,BCA法进行蛋白定量。复苏UC-MSCs,采用无血清培养基接种至6孔板,105/孔。在实验组的UC-MSCs中加入SHSY5Y细胞提取液,浓度为50ul/ml诱导7天。7天后分别检测两组细胞的表面标志物；分别检测目的基因BDNF和NGF在两组细胞中的表达情况。采用大鼠坐骨神经挤压损伤动物模型,36只SD雌性大鼠,随机分成6组(A-F),分别是生理盐水组,SHSY5Y提取液组,MSC组,SHSY5Y提取液和MSC组,诱导后的MSC组和正常对照组。术后观察各组大鼠肢体状况：步态变化,足趾挛缩、肌肉萎缩及恢复情况。参照沈江宁的足迹分析法,采用Brain公式计算坐骨神经功能指数(SFI)。术后3周检测大鼠小腿三头肌萎缩恢复情况,测定肌湿重恢复率(术侧小腿三头肌湿重/正常对照侧×100%),以评价再生神经对靶组织的支配程度。分析靶肌肉和神经病理学HE染色组织切片。结果1.应用胶原酶消化法分离脐带间充质干细胞,应用超声破碎法得到SHSY5Y提取液；2.培养对照组和实验组两组细胞,对两组细胞分别进行细胞表型鉴定,实验组MSC的CD29, CD44, CD105和HLA-ABC结果显示仍为阳性；3.分别提取两组细胞总RNA进行RT-PCR,实验组NGF和BDNF均有一定增加；4.制作坐骨神经挤压损伤模型,结果显示大鼠肌肉痉挛缓解程度均优于生理盐水对照组；5.坐骨神功能指数测定结果显示各实验治疗组与生理盐水组之间均有显著差异(P<0.05)；6.小腿三头肌湿重恢复率测定结果显示各治疗组与生理盐水组间对比有显著差异(P<0.05);7.术后3w取术侧小腿三头肌及损伤处坐骨神经做横切片HE染色,显示诱导后MSC组肌肉只有极少量的中性粒细胞,相对其他各组其神经髓鞘恢复较好。结论1. SHSY5Y提取液可使UC-MSCs分泌的NGF和BDNF核酸表达量有所增加；2. SHSY5Y提取液诱导的UC-MSCs能够更好地促进坐骨神经损伤后的修复。