绿豆皮牡荆素提取纯化及抗氧化活性研究

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绿豆皮是绿豆浸泡发芽后的种皮,医学上称其为绿豆衣。研究表明,绿豆抗氧化功效主要是由绿豆皮中的黄酮类物质提供的,其中的牡荆素含量占半数以上。因此,本文以绿豆皮为材料,对绿豆皮中的牡荆素进行提取和纯化,并探究其抗氧化活性,主要研究结果如下:1.纤维素酶辅助APG(烷基糖苷)联合超声提取绿豆皮牡荆素:以提取率为指标,在最佳单因素基础上通过正交试验和响应面试验优化提取工艺。得到最佳提取工艺为:液料比9:1、纤维素酶添加量0.4%、酶解温度50℃、酶解时间60min,沸水灭酶3 min,保留提取液,收集滤渣并按10:1的比例加入70%乙醇,添加并调整APG浓度为0.5%,p H 8.5、浸泡2.5 h后,在350 W、50℃下超声50min,合并两次提取液,此时有最大提取率94.04%与模型预测值一致,说明模型优化合理。2.绿豆皮牡荆素纯化工艺:考察不同型号大孔吸附树脂静态吸附解析能力,优选出HPD100B、D101、NKA-9和XAD-16四种树脂,通过动态吸附曲线进一步确定最佳树脂为HPD100B。单因素试验确定HPD100B树脂最佳吸附条件为:上样浓度1.5 mg/m L、上样p H 4.5、上样体积2 BV,上样速度2.0 m L/min。最佳解析条件为:解析液乙醇含量为70%、解析p H为5.0、解析液体积为3 BV,解吸速度为1.5 m L/min。通过HPLC分析得出提取液主要成分为牡荆素,纯化前后绿豆皮牡荆素纯度分别为37.74%和82.69%,证明HPD100B大孔吸附树具有良好的分离纯化牡荆素能力。3.绿豆皮牡荆素抗氧化活性研究:在前期提取纯化的基础上,考察绿豆皮牡荆素体外和细胞(HUVEC细胞)抗氧化能力,结果如下:绿豆皮总还原能力在一定范围内随浓度增加而增强,清除DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基的IC50分别为:0.119、0.132、0.127 mg/m L,抗氧化能力较强。H2O2质量浓度为900μmol/L时,细胞半数死亡,存活率达51.32%,为最佳模型损伤浓度;绿豆皮牡荆素浓度在60~200μg/L时,细胞存活率大于110%,浓度为60、80、100μg/L时,细胞存活率差异显著(P<0.05),浓度为100μg/m L时,有最大存活率131.68%;无论是损伤前预防还是损伤后治疗,不同浓度绿豆皮牡荆素均能显著降低细胞和培养液中MDA含量,增加SOD、LDH、GSH、GSH-Px含量,并存在一定剂量依赖性;当药物质量浓度为100μg/m L时,细胞保护能力几乎与同浓度下VC持平,说明绿豆皮牡荆素有较强的抗氧化能力。
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