背景:卡波氏肉瘤病毒（Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV）是卡波氏肉瘤（Kaposi’s sarcoma,KS）的病原体,且与原发性渗出性淋巴瘤（primary effusion lymphoma,PEL）和多中心Castleman病的发生密切相关。人类免疫缺陷病毒1型（human immunodeficiency virus type 1,HIV-1）与KSHV之间的相互作用在艾滋病相关的KS（AIDS-related KS,AIDS-KS）发生过程中发挥了重要作用。本课题组先前的研究发现,HIV-1反式激活蛋白（transactivative transcription protein,Tat）通过调控JAK/STAT信号通路激活KSHV的裂解性复制（J Virol,2007;81:2401）;HIV-1负调控因子（negative factor,Nef）则通过上调细胞micro RNA-1258靶向病毒的复制和转录激活蛋白（replication and transcriptional activator,RTA）来促进KSHV的潜伏感染（J Virol,2014;88:4987）。与Tat、Nef相似,HIV-1编码的另一种分泌型蛋白——病毒蛋白R（viral protein R,Vpr）是否能够通过调控KSHV生命周期从而影响AIDS-KS的发生?目的:研究HIV-1 Vpr蛋白对KSHV裂解性周期复制的影响,并鉴定此过程中涉及到的重要信号通路。方法:构建含有HIV-1 Vpr基因的重组原核表达质粒,运用蛋白质表达与纯化系统获得重组Vpr蛋白。将获得的可溶性Vpr与潜伏感染KSHV的PEL细胞和内皮细胞共孵育,通过免疫荧光法（immunofluorescence assay,IFA）观察Vpr是否可被上述细胞摄取。进一步,将可溶性Vpr加入潜伏感染KSHV的细胞中,采用实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR）检测KSHV裂解期基因以及部分细胞因子转录水平;免疫印迹（Western blot）检测KSHV裂解期蛋白表达,病毒颗粒释放实验检测KSHV子代病毒的释放情况。采用RT-q PCR、Western blot、IFA和萤光素酶报告实验检测可溶性Vpr对宿主细胞中两条重要的信号通路Notch和核因子-κB（nuclear factorκB,NF-κB）通路的影响。最后,通过过表达胞内Notch（intracellular Notch,ICN）以及抑制NF-κB活性的显性负性突变体IκB-DN,分别鉴定Notch信号与NF-κB信号通路在Vpr调控KSHV潜伏感染过程中的作用,以及这两条信号通路之间可能存在的上下游关系。结果:通过原核表达与纯化成功地获得了带有组氨酸标签的重组Vpr蛋白。Vpr蛋白可以被潜伏感染KSHV的PEL细胞与内皮细胞所摄取,并且能够在不引起细胞凋亡的前提下,在裂解期基因的转录、蛋白表达及子代病毒颗粒的产生等方面有效抑制上述细胞中KSHV的裂解性周期复制,并可改变一些细胞因子的表达。再者,Vpr蛋白可以抑制KSHV阳性细胞中的Notch信号通路,同时能够激活NF-κB信号通路。过表达ICN或显性负性突变体IκB-DN均可恢复被Vpr所抑制的KSHV裂解性周期复制。过表达ICN可以抑制NF-κB信号,相反,过表达显性负性突变体IκB-DN则对Notch信号通路无影响。结论:可溶性Vpr蛋白能够被潜伏感染KSHV的PEL细胞及内皮细胞所摄取,在基因转录、蛋白表达及子代病毒颗粒产生等不同层面上抑制KSHV裂解性周期复制的发生,帮助病毒维持潜伏感染,并改变部分细胞因子的表达。Vpr蛋白是通过抑制Notch信号通路,并活化下游的NF-κB信号来完成其抑制KSHV裂解性周期复制的过程。