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研究背景：IgA肾病以IgAl/低糖基化IgAl沉积于肾小球系膜区及毛细血管袢为病理特征,以血尿、蛋白尿、高血压及肾功能损害为主要临床表现,是世界范围内最常见的原发性肾小球疾病。大约20-40%的患者在诊断为IgA肾病的20年内进展至终末期肾功能衰竭,是导致终末期尿毒症的最常见原因。IgA肾病患者在黏膜组织,特别是上呼吸道和肠道黏膜感染后常出现阵发性肉眼血尿。既往也有研究IgA肾病患者在腭扁桃体摘除后出现一过性的尿检恶化,同时检测到血中IgAl一过性升高。即可以通过手术对腭扁桃体的牵拉、挤压等刺激,进行的腭扁桃体“激惹”试验。B淋巴细胞刺激因子(B-cell-activation factor,BAFF),是肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)配体超家族的重要成员。BAFF通过对正常B细胞的成熟、增殖和分化的影响,对维持B淋巴细胞在体内的发展和体内的平衡起着重要的作用。但其临床应用还需要进一步的研究。IgA具有IgAl和IgA2两种亚型,近年的研究证实低糖基化IgAl是IgA肾病的关键致病因子。IgAl与IgA2的主要区别点在于IgAl存在铰链区。在IgAl铰链区,β1,3半乳糖转移酶(C1GALT1)在其特异性分子伴侣(COSMC)的辅助下,通过UDP-半乳糖载体将半乳糖转移至IgAl的p1,3位乙酰半乳糖胺残基上,完成IgAl的糖基化修饰,而ST6GalNAcⅡ则将唾液酸转至IgAl的α2,6位乙酰半乳糖胺残基上,阻止了IgAl糖基化的修饰。IgA肾病外周血B淋巴细胞C1GALT1及COSMC活性明显下降,并且与IgAl病理损伤严重程度呈正相关,但是其活性下降的具体机制尚未阐明。既往研究发现,外周血B淋巴细胞在无刺激时ST6GalNAcⅡmRNA的表达与正常对照组相比降低,另有研究发现IgAl分泌细胞在IL-4、IL-6的刺激下ST6GalNAcⅡmRNA显著升高。本课题中我们通过对IgA肾病患者以及对照组腭扁桃体摘除前后的研究,以腭扁桃体摘除术作为腭扁桃体“激惹”试验,观察腭扁桃体摘除前后外周血中的改变,分析其与外周血中B细胞活化、IgAl及其糖基化之间的关系,为IgA肾病的防治提供新的理论依据和治疗靶点。第一章IgA肾病患者腭扁桃体摘除前后外周血BAFF及IgAl比较目的：检测腭扁桃体摘除前后,外周血单个核细胞(PBMC)中BAFF以及血浆中IgAl表达,分析腭扁桃体与B细胞活化及IgAl之间的关系。方法：收集经临床和肾脏病理确诊为IgA肾病患者在腭扁桃体摘除术术前(24-48h)术后(36-60h)的外周血16例做为IgA肾病组(IgAN组),行腭扁桃体摘除术的非IgA肾病患者术前术后外周血作为非IgA肾病组(non-IgAN组),以及正常对照组(healthy control组)16例。采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测BAFF在PBMC中mRNA的表达ELISA检测血浆中IgAl含量。结果：1.qRT-PCR结果提示IgA肾病患者术前BAFF mRNA表达水平高于正常对照组(P<0.01),IgA肾病患者术后BAFF表达较IgA肾病患者术前升高(P<0.01),并高于非IgA肾病患者术后(P<0.05)；2.IgA肾病患者术前外周血血浆中IgAl的含量高于正常对照组(P<0.05),IgA肾病患者术后血浆中IgAl的含量较术前升高(P<0.01),并高于非IgA肾病患者术后(P<0.05)；3.相关性分析提示PBMC中BAFF mRNA表达与外周血IgAl含量呈正相关(r=0.604,P<0.01)。结论：本章实验通过模拟腭扁桃体感染,观察到IgA肾病患者PBMC中BAFF基因表达增加,外周血血浆中IgAl含量升高与BAFF的关系密切,BAFF及其基因表达变化也有望成为一项评估患者IgA肾病病程变化的无创性检测指标。第二章ST6GaINAcⅡ、C1GALT1及COSMC在外周血单个核细胞表达及与IgAl低糖基化相关性分析目的：检测腭扁桃体摘除前后,PBMC中ST6GalNAcⅡ, C1GALT1及COSMC表达以及外周血血浆中IgAl的低糖基化水平,分析腭扁桃体对低糖基化IgAl影响及IgAl低糖基化的调控机制。方法：采用免疫组化方法检测IgA肾病患者与非IgA肾病患者腭扁桃体中ST6GalNAcⅡ的表达；采用qRT-PCR检测正常对照组、非IgA肾病组及IgA肾病组PBMC ST6GalNAcⅡ、C1GALT1及COSMCmRNA的表达；VVL-ELISA检测外周血血浆中IgAl低糖基化水平。结果：1.免疫组化结果显示ST6GalNAcⅡ在IgA肾病患者腭扁桃体中表达量高于非IgA肾病患者；2.qRT-PCR结果提示IgA肾病患者术前ST6GalNAcⅡ mRNA表达水平高于正常对照组(P<0.01),IgA肾病患者术后ST6GalNAcⅡ mRNA水平均较IgA肾病患者术前升高(P<0.01),并高于非IgA肾病患者术后(P<0.05)。IgA肾病患者术后36-48小时间,ST6GalNAcⅡ mRNA表达水平为术前的1.95倍(P<0.01)；术后48-60小时间,ST6GalNAcⅡ mRNA表达水平为术前的1.38倍(P<0.01)。3.qRT-PCR结果提示IgA肾病患者术后C1GALT1、COSMCmRNA水平均较IgA肾病患者术前降低(P<0.05)；4.与正常对照组相比,IgA肾病组外周血血浆中的IgAl低糖基化程度明显增高；5.相关性分析提示PBMC中ST6GalNAcII mRNA表达与IgAl低糖基化水平呈正相关。结论：IgA肾病患者腭扁桃体摘除术后,PBMC中ST6GalNAcII基因表达增加,C1GALT1、 COSMC基因表达减少,外周血血浆中Gd-IgAl含量升高,结合既往的研究,我们认为PBMC中ST6GalNAcII活性的增高及C1GALT1/COSMC活性的降低,导致了对外周血中低糖基化IgAl分泌的增多。