以经络学说为基础,衍生多种针灸方法。不同针灸方法在临床中各具特色,有其不同适应症及优势病种。针对肝纤维化(Hepatic fibrosis, HF)这一慢性病理过程,多种针灸方法均显示不错疗效,但何种针灸方法更优?不同针灸方法作用机制有何差异?为此,本课题通过对针灸治疗HF的古今临床、实验文献的总结,选用两种常用针灸方法天灸和电针,作用于常选腧穴肝俞穴对四氯化碳(carbon tetrachloride, CCl4)HF模型大鼠进行效应比较。天灸、电针作用的差异不仅体现在刺激方式上化学性刺激和电刺激的不同,亦体现在作用腧穴层次的不同,前者作用腧穴浅层皮部,后者则为在深层结缔组织、肌层。研究表明穴区不同组织结构差异决定并影响经穴特异性效应。肥大细胞(Mast cells, MCs)被认为参与穴位立体构筑,与经络功能活动密切相关。MCs在经络、腧穴处呈特异性密集分布,且在皮肤呈层次性分布,不同针灸刺激方法均可使穴区MCs趋化性募集及活化脱颗粒。故本课题在观察天灸、电针对HF防治效应的基础上,针对两者刺激方式和作用层次的不同,观察两者对肝俞穴区皮肤不同层次MCs及穴区皮肤形态、厚度的影响差异,从而探讨两者可能的不同效应机制。实验研究目的：比较天灸、电针肝俞穴对大鼠HF的防治效应差异,并从两者对肝俞穴区皮肤MCs及皮肤形态、厚度的改变差异,探讨天灸、电针作用的不同机制。方法：40只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、电针组和天灸组,每组10只。采用腹腔注射40% CCl4橄榄油溶液制备HF模型(0.3ml/100g,2次/周),共6周。第3周起,造模同时加入干预,正常组、模型组仅抓取束缚(20min/次,隔日一次),电针组予肝俞穴电针(1mA,50Hz,20min/次,隔日一次),天灸组予肝俞穴斑蝥贴敷(自制斑蝥膏剂置于穴贴,贴敷肝俞穴,6h/次,2次／周),共4周。治疗结束次日,去冠取血,检测血清肝纤四项：III型前胶原(precollagen type Ⅲ, PCⅢ)、ⅠV型胶原(collagen type Ⅳ, Ⅳ-C)、透明质酸(hyaluronic acid, HA)、层粘蛋白(laminin, LN);取肝左叶组织,HE染色观察病理变化；取左侧肝俞穴区备皮,甲苯胺蓝染色,分层次观察MCs及其脱颗粒情况,观察穴区皮肤形态并测量其皮肤各层次厚度。结果：1血清肝纤四项变化：模型组大鼠肝纤四项均显著高于正常组(P<0.01)；与模型组比较,电针组各项均无显著性差异,但PCⅢ、Ⅳ-C有下降趋势,天灸组Ⅳ-C、HA明显降低(P<0.05)；与电针组相比,天灸组LN明显下降(P<0.05)。2肝组织病理变化：①肉眼观察：正常组大鼠肝脏颜色鲜红,质地柔软,光滑,缘锐；模型组大鼠肝脏暗红,质变硬,表面呈细颗粒状,大量脂肪组织包绕,缘钝；电针组大鼠肝脏暗红或深红,质稍硬,表面尚光滑,偶见颗粒状改变,轻度脂肪组织包绕,缘较锐；天灸组大鼠肝脏深红,质地较软,表面光滑无颗粒,少有脂肪附着,缘锐。②HE染色观察：正常组大鼠肝小叶结构完整,肝索沿中央静脉为中心呈放射状整齐排列,间质未见明显纤维结缔组织增生。模型组大鼠肝小叶结构破坏,肝索排列紊乱,肝细胞可见变性坏死,汇管区和小叶间大量纤维结缔组织增生,假小叶形成。电针组、天灸组较模型组均有不同程度改善。电针组大鼠肝索排列紊乱,肝细胞部分变性,汇管区及其周围纤维结缔组织增生,短间隔形成。天灸组大鼠肝小叶结构基本正常,肝索排列整齐,仅见汇管区少量纤维结缔组织增生。3肝俞穴区皮肤MCs及其脱颗粒数(率)：①穴区MCs总数及其脱颗粒数(率)：a. MCs总数：模型组与正常组间无明显差异；电针组和天灸组较模型组显著增多(P<0.01)；电针组与天灸组间无显著差异。b. MCs脱颗粒数：模型组与正常组、电针组与模型组间无显著差异；天灸组较模型组、电针组显著增多(P<0.01,P<0.05)。c. MCs脱颗粒率：模型组、电针组和天灸组较正常组显著升高(P<0.05或P<0.01)；但三组间无显著差异。②穴区皮肤各层MCs分布：a.组内比较：各组皮下组织层、真皮网状层MCs总数显著高于真皮乳头层(P<0.01),正常组、模型组皮下组织层、真皮网状层及电针组皮下组织层、天灸组真皮网状层MCs脱颗粒数均显著高于真皮乳头层(P<0.05或P<0.01)；正常组、模型组和电针组皮下组织层MCs总数,及电针组皮下组织层脱颗粒数均显著高于真皮网状层(P<0.01),天灸组真皮网状层脱颗粒数显著高于皮下组织层(P<0.01)。b.组间比较：模型组与正常组各层MCs总数、脱颗粒数分布无明显差异；真皮乳头层与真皮网状层：天灸组此两层MCs总数、脱颗粒数均较模型组、电针组显著升高(P<0.05或P<0.01)；皮下组织层：MCs总数：电针组、天灸组较模型组均显著升高(P<0.01,P<0.05),电针组与天灸组间无显著差异；MCs脱颗粒数：电针组、天灸组较模型组均无显著性差异,电针组较正常组、天灸组显著升高(P<0.01,P<0.05)。4肝俞穴区皮肤形态及厚度：①皮肤形态：正常组大鼠皮肤形态正常,表皮结构界限清楚,呈典型复层排列,真皮层胶原纤维排列整齐致密,皮下组织层脂肪中度沉积；模型组表皮结构缺乏复层排列,细胞层变薄,数量减少,大小不一,排列紊乱,甚者细胞空泡变性,真皮层胶原纤维减少,皮下脂肪减少；电针组表皮细胞层变薄,真皮层胶原纤维减少,皮下脂肪减少；天灸组表皮角质层变薄,细胞层呈复层整齐排列,真皮内血管、腺体增生,皮下中度脂肪沉积。③皮肤厚度：a.总厚度：与正常组比较,其余三组大鼠肝俞穴区皮肤均显著变薄(P<0.01,P<0.01,P<0.05)；天灸组较模型组、电针组穴区皮肤显著增厚(P<0.01)。b.分层厚度：模型组真皮层、皮下组织层厚度均较正常组显著变薄(P<0.01,P<0.05)；电针组各层厚度与模型组均无明显差异；天灸组穴区皮肤各层次厚度则均明显高于模型组和电针组(P<0.05或P<0.01)。5肝俞穴区皮肤厚度与肝纤四项相关性分析：肝俞穴区皮肤总厚度与IV-C、HA和LN呈显著负相关,与PCIII无显著相关性。结论：①以40%CC14橄榄油溶液腹腔注射成功复制了肝纤维化大鼠模型。②天灸、电针均可不同程度改善CCl4HF模型大鼠血清肝纤四项水平,减轻其肝脏纤维结缔组织沉积,提示两者均有改善HF作用,且天灸优于电针。③天灸、电针对HF大鼠肝俞穴区MCs均有募集、激活作用,天灸作用更为显著；天灸、电针可引起穴区皮肤MCs趋向性分布的不同,天灸为真皮乳头层和真皮网状层,电针为皮下组织层。④HF大鼠肝俞穴区皮肤呈病理改变,厚度变薄,天灸可修复HF情况下皮肤各层结构病理反应,维持皮肤完整性,而电针无明显改变。肝俞穴区皮肤厚度与HF程度呈显著负相关,提示皮肤越薄,HF越严重。