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目的口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)是一种临床上较为常见的好发生于患者口腔及颌面部区域,严重危及患者生命及面容外形的癌症。尽管目前已经有越来越多的研究结果使人们对OSCC有了深入的了解,但是OSCC的确切识别分子仍然是未知的。因此,寻找新的分子靶标对于提高OSCC的治疗效果至关重要。先前的研究报告已经证明,蛋白质电压门控钠通道(voltage-gated sodium channels,VGSC)Nav1.5在各种类型的癌症中均高度表达,并参与调控患者体内癌细胞的众多恶性生物学行为的过程。但是,Nav1.5在癌症中的调控机制仍然尚不清楚。在这项研究中,我们首先通过实验发现Nav1.5在OSCC患者的组织和细胞系中均存在着有较为高度的表达。通过对患者的众多临床特征的分析发现,Nav1.5在OSCC患者组织内的表达量与患者的临床上中性粒细胞与淋巴细胞的比值(NLR)、血小板与淋巴细胞的比值(PLR)、肿瘤淋巴结转移(TNM)的分期等存在着有密切的相关性。此外,我们发现Nav1.5主要定位于细胞膜上,并且敲低Nav1.5表达水平可以参与调节HSC-3(human oral squamous cell carcinoma)细胞的凋亡能力的增强以及HSC-3细胞的增殖能力的下降。Transwell实验测定结果表明,通过敲低Nav1.5的表达水平可以有效地调节HSC-3细胞的转移以及侵袭进程的抑制。并且,我们发现si-Nav1.5抑制了Wnt/β-catenin信号通路中的关键基因β-catenin、下游靶基因cyclin D1和c-Myc的蛋白质和m RNA表达水平。以上的实验结果阐明了Nav1.5可能是通过调节潜在的Wnt/β-catenin信号通路来参与调控OSCC的发展进程的。方法选择安徽医科大学第一附属医院口腔颌面外科的8例原发性的、未进行过放化疗治疗的OSCC患者,在手术中收集他们术中切除的部分肿瘤组织作为实验组,以及肿瘤组织相邻的部分正常组织作为对照组。该研究在得到安徽医科大学伦理委员会的批准后才予以实施。通过免疫组织化学染色法以及Western blotting分析法首先比较Nav1.5在患者的OSCC组织层面上分别在实验组以及对照组的表达水平的差异。另外,对8例OSCC患者的临床特征以及Nav1.5的表达水平之间的相关联系做了分析。其次,通过对四种不同OSCC细胞系中Nav1.5表达水平的差异分析,选取Nav1.5表达水平最高的一株细胞系(HSC-3)进行后续的一系列细胞学研究。此外,通过激光共聚焦显微镜镜下观察在HSC-3细胞中的实施过免疫荧光染色后的Nav1.5的主要存在位置。通过RT-PCR、Western blotting分析以及免疫荧光染色实验检测确定siRNA技术对HSC-3细胞中的Nav1.5的沉默效率。通过CCK-8、流式细胞术和Transwell实验分别地检测si-Nav1.5对HSC-3细胞的生物学行为(包括细胞增殖以及凋亡、细胞周期、转移以及侵袭过程等)的影响。通过q RT-PCR和Western blotting分析检测转染后的HSC-3细胞中有关Wnt/β-catenin信号通路的基因(包括通路关键基因β-catenin和两个下游目标基因cyclin D1、c-Myc)的m RNA和蛋白质的表达量的不同。采用SPSS 19.0软件对实验的数据进行细致分析,测得的数据用“`x±SD”表达,所有的数据均使用t检验或单因素方差分析法进行统计学上的细致分析。P<0.05表示数据的差异性在统计学上具有重要的意义。结果免疫组化及Western blotting分析的实验结果显示Nav1.5蛋白在患者的口腔鳞状细胞癌的组织中存在着有较为高度的表达,而在邻近的正常组织中则只存在着有较为低度的表达。另外,患者组织中的Nav1.5的表达量在更高数值的中性粒细胞与淋巴细胞的比值(NLR,Neutrophil-to-lymphocyte ratio)、更高数值的血小板与淋巴细胞的比值(PLR,Platelet-to-lymphocyte ratio)、更高数值的肿瘤淋巴结转移分期(TNM stage,Tumor-Node-Metastasis stage)以及存在有淋巴结转移的患者组织中明显的更高。此外,通过对HSC-3细胞中Nav1.5的免疫荧光实验结果发现Nav1.5主要定位于细胞质及细胞膜上。另外,si-Nav1.5可以显著降低HSC-3细胞的增殖能力并增加其细胞凋亡,以及诱导细胞周期中G1期细胞的异常积聚。通过Transwell实验结果发现si-Nav1.5可以较为显著地降低HSC-3细胞中的转移及侵袭过程。另外,si-Nav1.5对Wnt/β-catenin信号通路中的关键基因β-catenin和通路的两个下游靶基因cyclin D1、c-Myc均存有较为明显的抑制作用。结论si-Nav1.5可以通过潜在的Wnt/β-catenin信号通路抑制口腔鳞状细胞癌的生物学行为