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目的研究报道尼古丁可以作用于特定的乙酰胆碱受体,不仅可以减少Aβ的产生,并且可以增加具有神经保护作用的分泌型的s APPα,因而为治疗AD提供一个方向,但是目前其作用机制尚不明确。本研究通过体外实验研究尼古丁对APP代谢的影响及其作用机制。方法APP被β分泌酶BACE1切割产生sAPPβ和C99或C89,C99和C89再被γ分泌酶的主要亚型PS1切割产生Aβ40和Aβ42,还有是APPα分泌酶ADAM10切割产生分泌型的sAPPα和C83,C83再被γ分泌酶的主要亚型PS1切割产生片段P3。1.采用浓度梯度的尼古丁(0M、10-7M、10-6M、10-5M、10-4M、10-3M)处理干预细胞6hr,用Western blotting检测APP及其产物C83蛋白的表达水平。并检测APP主要的切割酶ADAM10、BACE1、PS1的变化。2.分成一个对照组和尼古丁处理组,western blot检测胞内和膜上磷酸化的PKC和RACK1的变化。3.用PKC的抑制剂提前30min干预细胞,再用尼古丁处理6hr,western blot检测蛋白C83和media中s APPα的变化。4.最后用siRNA knockdown RACK1,然后用PKC的激动剂和尼古丁处理细胞后western blot检测C83的变化。结果1.用浓度梯度的尼古丁处理细胞后,western blot检测发现APP、BACE1、PS1的表达水平无明显差异,ADAM10和C83蛋白水平在尼古丁处理后明显增加。2.尼古丁处理后,导致膜上RACK1增加并且磷酸化的PKC水平也增加。说明PKC被激活了。3.PKC抑制剂处理后能够逆转尼古丁引起的C83和sAPPα增加现象,说明尼古丁作用于nAChR后经PKC介导的信号通路引起ADAM10表达上调,从而使得APP被更多的向非淀粉样蛋白路径代谢。4.siRNA knockdown RACK1部分实验,目前已筛选出一条有效的siRNA,需要进一步实验研究,用PKC激动剂和尼古丁处理,检测是否RACK1在PKC信号通路的上游。结论我们发现尼古丁确实能够使得APP更多向非淀粉蛋白路径代谢,并且是经过激活PKC,经PKC介导的信号通路进行的。这为治疗AD提供了一个潜在的思维方向。