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全球大约有1.7亿人感染丙型肝炎病毒(HCV),其中80%感染者将转变成为慢性感染。HCV感染可导致慢性肝炎、肝硬化、甚至肝癌。目前对HCV感染尚无有效疫苗，并且临床上聚乙二醇化α-干扰素(pegylated interferon alpha，PEG-IFNα)和利巴韦林(ribavirin，RBV)联合使用的标准HCV治疗方案治疗周期较长，患者不良反应较严重。所以，有必要开发安全、有效且对HCV感染耐受良好的治疗药物。NS5A蛋白在HCV生活周期中参与病毒RNA的复制和病毒颗粒的形成。由此可见，以NS5A蛋白作为抗HCV新型药物的靶点，存在巨大潜力。核酸适体（aptamer）是一类新型识别分子，有较强亲和力和较高的选择性，几年来在生物检测和新药开发等方面应用广泛。本文以NS5A为靶标蛋白，筛选出与之特异结合的aptamers，研究其对HCV生活周期的影响，并对aptamers的抗病毒机制做了初步的研究。本文将已构建好的重组质粒pET28b-NS5A转到BL21大肠杆菌感受态细胞中进行蛋白表达，利用重组蛋白上连接的His标签，用镍柱纯化得到目的蛋白。以纯化的NS5A为靶蛋白，经过8轮筛选，得到特异性结合的ssDNA aptamers。从中选择五条（NS5A-1、NS5A-2、NS5A-3、NS5A-4、NS5A-5）进行分析，发现这五条aptamers能够特异结合到NS5A蛋白上，且不与对照蛋白LacZ发生非特异性结合。利用分子生物学和免疫学方法检测aptamers处理后细胞中的病毒RNA复制和病毒颗粒组装或释放的变化。将NS5A蛋白分段真核表达，利用细胞内竞争实验初步确定NS5A aptamers和NS5A的结合区域。确定aptamers和NS5A的结合区段后，进一步对aptamers能够抑制病毒颗粒产生的机制进行研究。结果表明NS5A-4结合NS5A Domain I，对病毒RNA的复制有明显的抑制作用，并且能抑制NS5A在脂滴上的定位。NS5A-5对病毒颗粒的组装有抑制作用，通过抑制NS5A和Core的结合及病毒蛋白与病毒RNA的结合而实现。结论：NS5A aptamers通过抑制NS5A在脂滴上的定位以及与Core蛋白之间的相互结合，发挥抗病毒作用。针对NS5A aptamers抗病毒作用机制的研究能帮助我们更深入了解HCV生活周期，从而为HCV靶向治疗的研究提供新思路。