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由山羊关节炎脑炎病毒(CAEV)引发的山羊关节炎脑炎(CAE)是世界养羊业中破坏力最强、经济学意义最重要的病毒性传染病。本研究对CAEV89-GB1026株进行了全基因组克隆和序列测定,分析了CAEV的分子特性;应用环介导等温扩增技术,建立了CAEV快速检测方法;同时通过构建衣壳蛋白P25的原核表达载体,获得高纯度的重组表达蛋白,初步建立了CAEV感染羊抗体监测的ELISA方法。采用PCR的方法,扩增出覆盖CAEV全基因组的5个cDNA片段,分别将其克隆到pGEM-T easy载体,经序列测定、拼接获得了CAEV89-GB1026株的全基因组序列。该毒株基因组全长9065nt,包括一段453nt的5’LTR、3个结构基因(gag、pol和env)、2个调节蛋白编码基因(rev和tat)、1个辅助蛋白编码基因(vif)和一段308nt的3’LTR。序列比较结果显示,该毒株与甘肃分离株相似性为99.6%,与意大利分离毒株的相似性仅为73.0%~73.5%。依据gag基因对国内外分离株同源关系分析表明,该毒株属于小反刍动物慢病毒B亚群B2亚型,Gag蛋白中存在多个与MVV相同的抗原表位。在p25基因的高保守区设计了5条引物,应用LAMP扩增技术建立了CAEV快速检测方法。采用LAMP实时浊度仪对扩增反应进行检测,可在36min内检测数个拷贝的质粒,灵敏度相当常规PCR的100倍。分别应用琼脂糖凝胶扩散实验(AGID)、常规PCR和LAMP对68份临床样品进行了检测,阳性率分别为38.2%, 41.2%和50%。该方法可用于细胞培养物、感病动物全血和外周血淋巴细胞中CAEV原病毒DNA的特异性检测。应用生物信息学方法对衣壳蛋白P25和P25融合蛋白的生化特性进行分析,设计了不同的原核表达载体。将p25基因克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,在E.coli BL21细胞中可溶性表达,经GST亲和层析获得重组蛋白GST-P25。将p25基因克隆至原核表达载体pET28a,将重组质粒转化E.coli BL21(DE3)诱导表达,通过包涵体变性、复性的方法获得重组蛋白His-P25。应用免疫印迹两种重组蛋白的抗原性进行分析,重组蛋白可与CAEV阳性血清特异性地结合,表明重组蛋白具有良好的抗原性,并以His-P25为抗原,建立了检测CAEV抗体的间接ELISA。