南江黄羊MRF基因家族的分离克隆及其在肌肉组织中的表达规律研究

来源 :四川农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhangxi0922
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MRF基因家族在肌肉系统发育中扮演着关键的角色,它们精密调控肌肉细胞形成的起始、增殖、分化、融合和再生等过程。本研究以南江黄羊为实验材料,分别在出生后0d、15d、30d、60d、90d和120d时采取不同肌肉组织(半腱肌、半膜肌、背最长肌、股四头肌和臀中肌)。在肌肉组织中分离克隆得到山羊MRF基因家族四个基因的cDNA序列,然后使用实时荧光定量技术检测山羊MRF基因家族在不同肌肉不同发育阶段的相对表达量。结果表明:(1)成功克隆得到山羊MRF基因家族的四个基因序列,包括MyoD基因的一部分CDS区和.Myf5、Myf6、MyoG基因的全CDS区,其长度分别为551bp和960bp、837bp、856bp。其中CDS区长度分别为551bp、768bp、729bp、675bp。GenBank登录号分别为JF829004(Myf5)、HM204707(Myf6)、JF829005(MyoD)、JF829006(MyoG)。将四个基因序列与近源物种对比,发现它们的相似性都大于90%,说明MRF基因家族在不同物种间具有高度的保守性。(2)生物信息学分析发现,MRF家族基因编码的蛋白质都有较明显的亲水区,在N端都有可能存在信号肽。(3)通过Q-PCR得到MRF基因家族成员在6个时期和5个不同肌肉组织中的相对表达量。通过分析发现MRF基因家族表达不具有明显的性别差异,这表明在120d以前,性别对MRF基因的表达没有显著性差异。(4) Myf5、Myf6和MyoD基因在同时期的各组织中差异比较大,MyoG基因在半膜肌中表达量极显著(P<0.01)高于其它组织,而其它组织间无显著差异。(5)定量PCR检测MRF基因家族的表达规律变化情况。结果表明,Myf5基因的表达量峰值出现在15d和120d,而Myf6基因的表达峰值出现在90d。MyoD基因的表达峰值出现在0d,然后基因表达量下调并保持稳定。MyoG基因的表达在不同肌肉组织发育时期没有显著性差异。
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