猪瘟（Classical swinefever,CSF）是危害家猪健康的最重要传染性疾病之一,世界动物卫生组织（Office International des Epizooties,OIE）重视该疫病的防控并将其列为必须通报的传染病。我国防控猪瘟的主要方法是接种猪瘟兔化弱毒苗C株。有报道表明,属于基因1型的C株疫苗对近年来流行的基因2型猪瘟野毒的保护效力呈下降趋势。因此,为应对2型毒株的流行,本研究利用反向遗传学技术构建携带流行毒株高变区的嵌合重组C株感染性克隆。目标是:1)获得携带流行毒株高变区的嵌合C株重组毒株;2)通过免疫和攻毒保护试验确定该重组毒株对2.1d流行毒株的保护效力;3)比较重组毒株与C株免疫猪血清的中和活性。1.携带流行毒株E2高变区C株嵌合病毒的拯救与鉴定以本实验室前期构建的C株感染性克隆pA-RecC为基础,将流行毒株QZ14 E2 上的高变区 AR1（Hypervariable Antigenic Region 1）嵌合于 pA-RecC 骨架中,成功构建了携带QZ14AR1区的重组病毒RecC-fAR1。通过RT-PCR和IFA鉴定证明QZ14AR1成功整合到病毒基因组中,且病毒感染细胞后能够稳定表达嵌合QZ14 AR1的E2蛋白,为后续免疫及攻毒保护试验及血清中和试验提供了实验材料,并为新型猪瘟疫苗的开发提供了参考。2.猪瘟病毒C株嵌合毒株RecC-fAR1对2.1d型流行毒株的保护效力将实验用猪分组,分别注射RecC-fAR1、疫苗C株和DMEM（作为不免疫对照）。免疫后第28天,各组以肌肉注射方式接种QZ14毒株。免疫RecC-fAR1组的猪体状况良好,无表观症状及组织器官病变;RecC-fAR1和C株均能诱导产生针对CSFVE2的抗体,且RecC-fAR1能够产生更高水平针对QZ14 E2的抗体;免疫RecC-fAR1和C株的猪只能有效抵抗QZ14毒株的感染。证明基于疫苗C株的重组病毒RecC-fAR1诱导机体产生针对流行毒株抗体的能力更强,能有效保护机体免受野毒感染。3.重组C株RecC-fAR1与疫苗C株免疫猪血清的中和活性比较本实验室早前的研究证实AR1区域的氨基酸变异会影响C株免疫血清对流行毒株的中和效果。本研究比较了 RecC-fAR1和C株血清对流行毒株的ELISA效价和中和活性的差异。结果显示,RecC-fAR1免疫血清针对QZ14的ELISA效价及中和效价均显著高于C株,而其针对石门株的ELISA效价和中和效价与C株均无显著差异,而且ELISA效价与中和效价呈正相关。依据上述结果,我们初步确定RecC-fAR1可以作为针对2型CSFV流行毒株的一个候选疫苗株,免疫保护效力可望优于现用C株疫苗。本研究的实践成果对防控2型猪瘟疫情具有参考价值和现实意义。