日本血吸虫病是我国一种危害严重的人畜共患寄生虫病。由于治疗药物吡喹酮不能解决重复感染难题,而且有可能诱导产生抗药性,因此有必要研制高效、安全的抗血吸虫病疫苗和新治疗药物。血吸虫同其它寄生虫一样,通过新陈代谢在宿主中进行物质和能量交换。目前一般认为,血吸虫的能量主要是通过糖酵解过程获得的。由烯醇化酶参与糖酵解途径,是细胞能量代谢的一个关键途径,对动物的生长发育起着重要的作用,所以本文对这个基因进行了克隆、表达、定位及生物学功能的初步研究。1在本实验室双向电泳研究基础上,根据NCBI中GenBank登录号L23324设计特异引物克隆获得编码日本血吸虫烯醇化酶SjEno的编码基因。SjENO基因的ORF含1305bp,编码434个氨基酸,理论分子量47250.37。构建了pET28a（+）-SjEno重组质粒转入宿主菌BL21（DH5α）,并于大肠杆菌中成功表达并纯化。2经Western blotting显示表达产物能被日本血吸虫成虫抗原免疫兔血清所识别,具有良好的抗原性。应用该重组蛋白免疫BALB/c小鼠,获得了24.28%的肝组织减卵率和21.45%的粪便减卵率,显示该重组蛋白可诱导部分的免疫保护效果。rSjEno重组蛋白免疫组小鼠在3次免疫后产生了高滴度的特异性IgG抗体。3利用免疫荧光技术观察SjEno在日本血吸虫28d及42d成虫中的表达定位。免疫荧光观察表明,在血吸虫28d及42d成虫的体表均可见荧光信号,在虫体内部和消化道肠管中也可见荧光信号。在血吸虫头、中、尾部的荧光信号没有明显差异。研究结果表明,日本血吸虫SjEno蛋白可以在虫体的体被表膜部位表达。4检测日本血吸虫SjEno重组蛋白的酶学活性,用连续监测法,利用紫外分光光度计检测在240nm时磷酸烯醇丙酮酸酯吸光度的增加量（正向反应2-PGA→PEP）或减少量（反向反应PEP→2-PGA）。试验结果显示2-PGA→PEP中所测得的活性为35.81±2.02U（mg protein）^-1;反向反应PEP→2-PGA测得的活性为15.87±0.966U（mg protein）-1。不管使用何种底物rSjEno酶最佳活性pH值范围为6.5-7。在检测浓度范围内KCL、LiCL、NaCL、MgCL₂、CaCL₂在检测浓度范围内对rSjEno酶活性有一定的抑制作用。ZnCL2在以2-PGA为底物的rSjEno对酶活性均有抑制作用。而ZnCL₂的浓度为2.5mM-7.5mM则对以PEP为底物的rSjEno酶有很强的激活作用。温度值范围从15℃到45℃对rSjEno酶活性的影响不大。