白细胞介素-35对巨噬细胞表型影响的研究

来源 :中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:welletboy
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目的:巨噬细胞来源于骨髓多能干细胞,是先天免疫系统的重要组成部分。不同的微环境刺激可使巨噬细胞表现出不同的形态、表型及功能,可分为促炎M1型巨噬细胞(又称经典活化的巨噬细胞)和抗炎M2型巨噬细胞(又称选择活化的巨噬细胞)。M1型巨噬细胞主要参与炎症的起始和维持,清除病原体的入侵并可扩大炎症反应;M2型巨噬细胞则可表现出很强的抗炎活性,分泌的抗炎因子和生长因子,如IL-10,TGFβ1和VEGF对炎症后期的修复和组织重塑起着重要作用。通过这两种不同的形态、表型及功能上差异来调控炎症反应的现象称为极化现象,巨噬细胞则可以通过极化现象在皮肤创伤的组织修复、再生和纤维化过程中起到重要的调节作用。当皮肤发生创伤时,在血液循环中散在的单核细胞便迁移到创伤处并在细胞因子的刺激下分化为巨噬细胞。接下来巨噬细胞会根据微环境的变化发生表型和功能的进一步改变,继而参与到创伤修复的不同阶段。比如Th1和Th2细胞便可分别分泌不同的细胞因子诱导巨噬细胞产生极化现象。Th1细胞产生的IFN-γ和TNF-α刺激巨噬细胞并激活为促炎M1型巨噬细胞;Th2细胞产生的IL-4和IL-13可使巨噬细胞被极化为抗炎M2型巨噬细胞。此外,单核细胞在GM-CSF的诱导下可培养发育成M1型巨噬细胞;单核细胞在M-CSF诱导下可培养发育成M2型巨噬细胞。IL-35属于IL-12细胞因子家族,是该家族最新被发现的成员,是由EBi3和IL-12p35两个亚基组成的异二聚体结构,由调节性T细胞分泌产生,具有重要的免疫调节功能。已有研究证实,IL-35可抑制Th1、Th2和Th17细胞的分化,并促进T-reg细胞和效应T细胞的增殖来发挥免疫抑制功能。在本研究中,探索IL-35对巨噬细胞表型转换的作用,将为慢性伤口愈合的治疗提供新的思路。研究方法:THP-1细胞在有GM-CSF和M-CSF的环境里培养三天,以激活其向M1和M2型巨噬细胞的极化。利用IFN-γ和LPS刺激THP-1细胞后,用ELISA和Real-time PCR检测M1和M2型巨噬细胞的表型。收集可表达IL-35的CHO细胞和对照的CHO细胞的培养上清液,即可分别得到IL-35细胞因子和对照处理液,用以后续实验。利用ELISA检测THP-1细胞培养上清液中促炎细胞因子及抗炎细胞因子的蛋白水平表达。利用Real-time PCR检查细胞因子和细胞表面受体IFN-γ和IL-35(IL-12Rβ2和gp130)的基因水平的表达。结果:1.THP-1在经过处理后可极化为具有明确表型的M1和M2巨噬细胞,其中GM-CSF用于激活M1型巨噬细胞,M-CSF用于激活M2型巨噬细胞。2.GM-CSF的预处理对于THP-1细胞响应IFN-γ并产生IL-23和TNF-α至关重要。3.IL-35可以抑制M1型巨噬细胞释放促炎性细胞因子IL-23和TNF-α。结论:IL-35是一种有效的免疫抑制细胞因子,可降低经IFN-γ诱导的M1巨噬细胞中IL-23和TNF-α的表达,进而将M1型巨噬细胞转化为M2型巨噬细胞。
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