杏种质资源的ISSR分子标记及数量分类研究

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杏是蔷薇科(Rosaceae)、李亚科(Prunoideae)、杏属(Armeniaca Mill.)植物,原产于我国,栽培历史悠久,种质资源十分丰富。杏既是优良的果品又是重要的观赏植物资源,一直受到人们的关注。近年来国内外对杏种质资源的研究和利用做了大量的工作,但是,在国内结合杏的观赏性状数量分类和ISSR分子标记的研究却未见报道。本文对来自公主岭寒地果树资源圃中的92份杏材料进行了ISSR分子标记研究和其中72份杏材料的观赏性状形态学数量分类,探讨杏观赏性状形态鉴定的主成分及其遗传变异规律(遗传多样性变化规律),研究其亲缘关系并明确分类地位,为杏种质资源的深入研究与利用提供科学依据,为杏核心种质的构建和资源的科学保存提供依据。主要研究结果如下:1.对影响PCR反应体系的主要成分及退火温度进行筛选和优化,确立了适合杏ISSR-PCR分析的最佳反应体系:在20μL的反应体系中,模板DNA用量为50ng/μL,Taq酶1.0U,dNTPs浓度为0.2 mmol/L,引物浓度为0.25μmol/L。筛选出了10个适宜杏材料遗传分析的ISSR引物,确定最适宜退火温度为54~55℃。2.从35个ISSR引物中筛选出10条适宜杏材料ISSR分析的引物。共在86个位点上扩增出条带,其中多态性位点83个,多态性百分率为96.5%。每一个扩增出来的DNA条带的数目在6~12条带之间,平均每一个引物获得8.6个扩增带,其中具有多态性的带为8.3个。3.对92份杏材料进行了遗传多样性分析,绘制了遗传聚类图谱,以0.7为阈值,将92份材料分为三组:第1组包括龙垦14号杏、A1B20和牡红杏3个普通杏品种;辽杏单独为一组;其他88份材料为第三组,它们与3个普通杏品种先聚到一起,说明它们与普通杏亲缘关系较近。4.运用数据分析软件,以72份杏材料作为分类运算单位,选用22个形态性状进行聚类分析和主成分分析。Q型聚类分析将72份杏材料分为两个组群。R型聚类分析揭示了所选性状没有明显的聚为几组,大部分性状是独立的。经主成分分析,22个性状可综合为9个主成分,其累积贡献率达72.468%。第1主成分包括特征向量绝对值较大的性状是叶片长、叶片宽、叶柄长、初蕾大小、大蕾大小、花冠直径、花瓣厚薄,说明第1主成分是由叶片、花蕾、花冠、花瓣不同器官的几个实际测量值性状组成的一个综合指标;第2主成分特征向量绝对值比较大的性状是叶片形状、叶尖形状、一年生枝颜色及花萼颜色,同样是杏分类的重要特征因子;第3主成分中,花瓣颜色、花苞颜色、花瓣形状和树势影响较大,主要为花瓣器官的性状特征;第4主成分特征向量绝对值较大的性状是树姿所占比重最大;第5主成分中特征向量绝对值较大的性状是叶基形状。第6主成分中叶面状态、多年生枝颜色影响较大。第7、8、9主成分中特征向量绝对值较大的性状分别是叶片颜色、花瓣状态、叶锯齿形。在主成分1选择基础上,适当的对其它8个主成分进行选择,就可以达到预期的效果。5.从聚类结果看初步认为:试验所用的杏材料ISSR标记结果与观赏性状数量分类结果有一定的相似性,但多数试材的亲缘关系与形态特征关系不大,所用试材间表现有较高的杂合性。
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