富勒烯衍生物作为质荷比位移试剂在MALDI-TOF-MS分析小分子中的应用

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基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)基于其操作简便、检测速度快、通量高、抗干扰能力强、有机溶剂消耗少以及样品用量少等优点,已广泛应用于蛋白质,糖类,核酸,多肽等生物大分子以及高分子聚合物的结构分析与分子量测定。但是,由于传统的MALDI MS基质主要为低分子量的有机酸例如:o1-氰基-4-羟基-肉桂酸(CHCA、2,,--羟基苯甲酸(DHB)、芥子酸(SA),烟酸等,它们非常容易在低分子量区域(<800 Da)产生大量基质信号峰,干扰目标分子质谱峰的鉴定,并且由于基质-样品点在靶板上分布不均匀的问题,使得MALDI MS重现性差,阻碍小分子分析物的检测及定量分析。自1985年富勒烯被发现,一个全新的碳化学世界展现在科研工作者面前,富勒烯是一系列具有三维笼形结构的芳香化合物。富勒烯的三维空间结构及其大的共轭体系使其具有非常独特的物理化学性质,为富勒烯科学的研究发展提供了非常广阔的空间。富勒烯的化学修饰及其衍生物的性质研究已经是目前最为活跃的富勒烯化学研究领域之一。近30年的发展,富勒烯的化学修饰已非常成熟,一系列的官能团如氨基、羧基等都可以通过亲电、亲核加成反应、自由基加成反应和环加成等反应接枝到富勒烯表面,并使得官能团化的富勒烯具有一定的化学反应活性。基于此,我们提出富勒烯标记策略结合MALDI-TOF-MS来达到检测小分子化合物的目的。利用富勒烯衍生物标记小分子化合物,通过衍生反应,小分子化合物分子量至少增加720Da,从而将目标分析物的质荷比(m/z)从小分子区域移至大分子区域,避免小分子基质的干扰。除此之外,被富勒烯标记的分析物都保有富勒烯本身的性质,从而使得衍生产物均含有相似的MALDI-TOF-MS的响应,并且可以利用易获得的富勒烯类似物作为内标校正仪器信号。基于以上思路,我们开展了以下工作:1、合成两种具有化学活性的富勒烯衍生物NHS-C60和Br-C60,并考察其是否与小分子化合物发生衍生化反应,验证富勒烯衍生物作为MALDI-TOF-MS质荷比位移试剂的可能性;2、利用NHS-C60与氨基酸的反应,考察富勒烯标记策略在检测分析复杂生物样品中的小分子化合物的可行性。
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