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目的:本研究在检测胃癌及癌旁正常组织的基础上,探讨MGMT(6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶)以及RASSF1A(RAS相关区域家族1A)基因启动子区甲基化的状况,分析胃癌及癌旁正常组织中两组基因的甲基化改变情况,主要分析在胃癌产生、进展中MGMT和RASSF1A基因启动子甲基化状况的作用。胃癌是一类普遍的消化道恶性肿瘤,在世界范围内死亡率在全部恶性肿瘤中占据第二位。多阶段变异、多基因累积产生的异常状态是类似胃癌和其他恶性肿瘤的发生基础。细胞周期调节基因、DNA错配修复基因和肿瘤抑制基因等是胃癌中产生多种因DNA甲基化而失活的基因。方法:(1)收集青岛市市立医院2012年至2013年手术切除的,经病理检查证实的胃癌标本60例,癌旁正常组织取自相应距肿瘤边缘5cm以上的黏膜60例。分别提取DNA,将提取的DNA进行亚硫酸钠修饰,将最后修饰的DNA进行PCR扩增。通过甲基特异性聚合酶扩增链式反应(methylation specific PCR, MSP)检测胃癌组织及相应癌旁正常组织MGMT、RASSF1A基因启动子的甲基化状况。综合分析两个基因的甲基化与胃癌发生的关系。(2)分别提取60例胃癌组织与癌旁正常组织的RNA,逆转录合成cDNA,继而进行PCR扩增,用实时荧光定量逆转录-多聚合酶链反应(real-time RT-PCR)检测基因MGMT、RASSF1A的mRNA表达情况。(3)取胃癌组织、癌旁正常组织,用免疫组织化学方法分析MGMT及RASSF1A基因的表达情况,同时探讨它们与胃癌发生的关系。实验采用统计学软件包SPSSl7.0进行统计学分析数据,计数资料的比较采用χ2检验,组间应用t检验进行分析;以P<0.05表示有统计学意义。结果:(1)通过甲基特异性聚合酶扩增链式反应(methylation specific PCR, MSP)检测胃癌组织MGMT启动子区甲基化率为45.00%(27/60)明显高于正常组织8.33%(5/60),胃癌组织RASSF1A启动子区甲基化率为64.70%(37/60)明显高于正常组织6.67%(4/60),胃癌组织中MGMT、RASSF1A基因的甲基化阳性率较正常组织明显升高(P <0.05)。(2)通过实时荧光定量逆转录-多聚合酶链反应检测胃癌组织中MGMTmRNA表达阳性率为38.3%(23/60)明显低于正常组织96.67%(58/60),胃癌组织中RASSF1AmRNA表达阳性率为20.00%(12/60)明显低于正常组织100%(60/60),差异有统计学意义(P <0.05)。(3)通过免疫组织化学SP法检测MGMT蛋白表达在胃癌组织的31.61%(19/60)明显低于癌旁正常组织中的阳性率为90.00%(54/60),RASSF1A在胃癌组织的30.00%(18/60)明显低于癌旁正常组织中的阳性率为91.67%(55/60),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)用甲基特异性聚合酶扩增链式反应、实时荧光定量逆转录-多聚合酶链反应和免疫组织化学SP法检测胃癌组织中存在一定程度的MGMT、RASSF1A基因启动子高甲基化和蛋白表达缺失,是胃癌发生的重要途径之一。(2)胃癌组织中MGMT、RASSF1A基因的mRNA表达明显低于癌旁正常组织,是胃癌发生的重要的分子机制。