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目的:本实验检测胃癌组织以及癌旁组织中6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)基因的甲基化以及MGMT蛋白的表达情况,分析MGMT基因甲基化的状态与胃癌发生以及发展的关系。探究胃癌组织以及癌旁组织中DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)蛋白表达情况,分析其与胃癌的关系及临床意义。另外还对胃癌组织中MGMT甲基化与DNMT1蛋白表达的关系进行初步的探究。方法:1.收集青岛市市立医院普外科于2015年1月至2016年7月切除的60例胃癌患者的新鲜胃癌组织及其相应的癌旁组织标本,胃癌组织取自癌灶中央非坏死区域,癌旁组织取自距离癌组织5cm以上,且术前未行放疗、化疗、靶向治疗等抗肿瘤治疗。提取组织DNA,采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测上述组织标本中MGMT基因甲基化状态。分析MGMT基因甲基化与胃癌的关系。2.提取胃癌组织及相应癌旁组织中的RNA,应用逆转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)检测MGMT及DNMT1的mRNA的表达情况。3.用免疫组化SP法(IHC)检测胃癌组织以及相应的癌旁组织中MGMT和DNMT1的蛋白表达情况,综合分析MGMT及DNMT1表达与胃癌的关系,并对胃癌中MGMT基因甲基化及DNMT1蛋白表达的关系进行初步探讨。结果:1.胃癌组织中MGMT基因甲基化率为45.00%(27/60),明显高于癌旁组织(13.33%,8/60),差异有意义(χ2=14.56,P<0.001)。2.胃癌组织中MGMT mRNA阳性表达率低于癌旁组织(41.67%vs93.33%,χ2=36.51,P<0.001);而胃癌组织中DNMT1 mRNA阳性率明显高于癌旁组织(76.67%vs18.33%,χ2=40.94,P<0.001)。3.MGMT mRNA阴性表达的胃癌组织中其基因的甲基化率较阳性表达者升高(57.14%vs28.00%,χ2=11.96,P<0.05)。4.胃癌组织以及癌旁组织中MGMT以及DNMT1蛋白表达情况与mRNA表达基本一致,MGMT蛋白在胃癌组织中的表达阳性率(40%,24/60)明显低于癌旁组织(93.33%,56/60),差异有统计学意义(χ2=38.4,P<0.001)。而DNMT1在胃癌组织中的表达阳性率(76.67%,46/60)却明显高于癌旁组织(6.67%,4/60),差异有意义(χ2=60.48,P<0.001)。5.胃癌组织中MGMT与DNMT1蛋白表达呈负相关(r=-0.795,P<0.01)。结论:1.MGMT基因高甲基化与胃癌的发生以及发展有关。2.MGMT的低表达以及DNMT1的高表达在胃癌的发生过程中起重要作用。3.在胃癌中MGMT高甲基化改变可能是导致MGMT低表达的原因之一。4.DNMT1可能调控MGMT基因的甲基化过程。意义:胃癌是一种死亡率很高的恶性肿瘤,大部分胃癌患者确诊时已处于晚期阶段,其早期诊断十分重要。胃癌产生与演变过程极为复杂,涉及环境、遗传等各个方面,其中DNA甲基化在胃癌发生过程中起到一定作用。本实验在表观遗传学水平,研究MGMT基因高甲基化及DNMT1蛋白表达与胃癌的关系,为胃癌的诊断、肿瘤分期以及预后等方面提供思路。