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研究表明，B7基因在肿瘤细胞表面表达对T淋巴细胞(主要抗肿瘤细胞)的活化及细胞因子的产生十分重要，大多数肿瘤细胞表面不表达B7分子(B7.1或B7.2)，或表达水平很低，使肿瘤细胞能逃避机体的免疫监视。同时，人体绝大多数肿瘤(近90％)有端粒酶的活化表达。端粒酶的活化参与了细胞的癌变过程，端粒酶逆转录酶(hTERT)作为端粒酶活性表达的决定因素，仅在端粒酶阳性的肿瘤细胞中高表达，在端粒酶阴性的正常细胞中不表达，hTERT作为肿瘤特异表达的相关抗原，可成为肿瘤治疗的靶点。本研究拟将B7.2基因与hTERT基因拼接构建真核表达质粒，组成肿瘤靶向基因治疗系统，以从而实现对肿瘤靶向治疗的目的。 目的： 构建同时表达B7.2和hTERT的真核表达载体。为进一步研究恶性肿瘤靶向基因治疗作准备。 方法： 参照GenBank B7.2、hTERT基因序列，应用Oligo 6.0基因分析软件分析设计PCR引物，并在两基因两端分别加上XhoⅠ、KpnⅠ和KpnⅠ、XbaⅠ限制性酶切位点。用RNA提取试剂盒分别从乳腺组织、乳腺癌组织中提取总RNA，再用RT-PCR方法，扩增目的基因B7.2和hTERT。然后用胶回收试剂盒纯化B7.2基因和hTERT基因PCR产物，分别与载体PGEM-T Easy连接。将构建的pGEM-T-B7.2用质粒纯化试剂盒提取，再用XhoⅠ、KpnⅠ内切酶将B7.2从质粒上切取、胶回收纯化后，与用XhoⅠ、KpnⅠ酶切过的pEGFP-C3真核表达质粒