14-3-3ε对胃癌细胞系SGC7901生物学行为的影响

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目的:研究14-3-3ε的表达水平对胃癌细胞SGC7901细胞增殖、周期及裸鼠皮下成瘤能力的影响及相关机制。方法:①采用靶向干扰14-3-3ε的shRNA转染SGC7901胃癌细胞,用嘌呤霉素进行抗性筛选,挑选单克隆进行增殖培养,用Western Blotting验证14-3-3ε的表达,建立14-3-3ε;稳定低表达的细胞系(即转染组)、对照组为转染无干扰作用的shRNA的SGC7901胃癌细胞、未转染组为SGC7901胃癌细胞。②用MTT法检测各组细胞的增殖能力,用流式细胞仪测定细胞周期,检测各组细胞处于细胞分裂周期中不同时期的细胞百分比。③将细胞接种于Balb-c裸鼠前腋部皮下,根据瘤体体积的变化判断各组细胞皮下成瘤能力。④用Western Blotting检测各实验组细胞周期相关蛋白cyclin E和p27kip1的表达。结果:①成功构建14-3-3ε稳定低表达的细胞系。②MTT比色法转染组吸光度值明显低于未转染组(P<0.05);流式细胞仪细胞周期分析转染组处于G1/G0期的细胞百分比高于未转染组(P<0.05),处于S期的细胞百分比低于未转染组(P<0.05);裸鼠皮下成瘤实验转染组瘤体体积增长明显慢于未转染组(P<0.05)。③Western Blotting结果发现转染组cyclin E蛋白表达下调,显著低于未转染组(P<0.05),而p27kipl蛋白表达上调,显著高于未转染组(P<0.05)。结论:①成功建立了用shRNA进行RNA干扰的14-3-3ε稳定低表达的SGC7901胃癌细胞株;②通过下调SGC7901胃癌细胞中14-3-3ε蛋白的表达使胃癌细胞增殖抑制、细胞周期G1/S期阻滞及裸鼠皮下成瘤能力降低,14-3-3ε可望成为胃癌诊断的指标和靶向治疗的靶点;③下调SGC7901胃癌细胞14-3-3ε表达使cyclin E表达下调,p27kip1的表达上调,提示其抗肿瘤作用与细胞周期的调控有关。
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