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目前,在富养化的河流和湖泊中形成蓝(Cyanobacteria)水华在世界范围内都有发生。而微囊藻(Microcystis)是淡水水体中形成蓝藻水华最常见的藻种。微囊藻毒素(MC,Microcystin)是由淡水蓝藻产生的一类具有肝毒性的生物活性物质。它能够抑制蛋白磷酸酶1(PP<,1>)和2A(PP<,2>A)的活性,使细胞内的蛋白磷酸化和去磷酸化失衡。微囊藻毒素能够对人体产生一系列的危害,如肝毒性、肾毒性、肠毒性和促癌作用等。出于对这些公共卫生问题的考虑,人们试图阐明控制有毒蓝藻的环境因子对蓝藻生长和产毒的影响,特别是氮磷元素。本论文研究的目的主要有:1.建立微囊藻毒素的高效液相色谱检测方法。2.阐明培养液中初始磷浓度对微囊藻细胞生长和微囊藻毒素产生的影响。3.研究不同磷浓度,不同氮磷比值条件下微囊藻生长及微囊藻毒素产生情况及二者之间的相互作用。在本研中应用高效液相色谱测定铜绿微囊藻细胞内的微囊藻毒素。分别用藻细胞浓度和藻细胞干重来表示藻细胞的生物量。
本次研究的的主要结论如下:
1、500ml水样经过预活化的固相萃取柱浓缩,20%甲醇淋洗后。洗脱液浓缩后经HPLC分离并用二极管阵列检测器检测器(DAD)在238nm处分析。该方法具有较好的精密度和回收率。对微囊藻毒素的加标回收率分别为MC-LR:89%和MC-RR:86%。方法检出限为0.04μg/L。
2、培养液中的初始磷浓度对铜绿微囊藻的生长和微囊藻毒素的产生均能产生较大的影响。当磷浓度低于5.0mg/L时,微囊藻细胞的生物量和微囊藻毒素的产量均随培养液中初始磷浓度的升高而增高。而当培养液中磷浓度为10.0mg/L时,过高的磷浓度却对微囊藻的生长和微囊藻毒素的产量产生了明显的抑制作用。
3、在磷浓度为0.05mg/L的培养液中,当氮磷比值为50:1时,微囊藻细胞具有最大的生物量,但是各培养组之间的差别不显著。而在磷浓度为5.0mg/L的培养液中氮磷比值为20:1培养时,微囊藻细胞具有最大生物量,并且各培养组之间的差别显著。说明只有在培养液中的磷充足的条件下,氮磷比值才对铜绿微囊藻细胞的生物量产生显著的影响。并且这种影响也要小于由磷浓度变化所引起铜绿微囊藻生物量的变化。应结合磷浓度来确定微囊藻细胞生长的最适氮磷比值。
4、浓度为0.05mg/L的培养液中,氮磷比值在50:1时,细胞中微囊藻毒素的含量最高,在磷浓度为5.0mg/L的培养液中,氮磷比值为20:1时,细胞中微囊藻毒素的含量最高。这与培养液中微囊藻细胞具有最大生物量时的氮磷比值相同。
5、在培养过程中,各培养组单个细胞中微囊藻毒素的含量随着培养时间的延长逐渐降低。但是单位体积培养液中微囊藻毒素的总含量却出现了随着微囊藻细胞生物量增高而逐渐增加的趋势。这说明虽然不同的磷浓度和不同的氮磷比值会对单个细胞内微囊藻毒素的含量产生一定的影响,但是这两个因素主要通过影响微囊藻细胞生物量来影响微囊藻毒素的产量。
6、微囊藻毒素的产生率和微囊藻细胞的比增长率之间具有很好的正相关关系。说明,微囊藻毒素的产生与细胞的生长、增殖密切相关。虽然,微囊藻毒素是微囊藻细胞的次生代谢产物,但是其对微囊藻细胞的生长代谢具有十分重要的意义。