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背景与目的:卵巢癌是女性生殖系统中最恶性的肿瘤,在女性生殖系统癌症中其发病率位居第三位,但致死率在妇科癌中最高。目前卵巢癌的一线治疗方案是外科手术联合化疗,75%的患者会出现复发和的耐药。研究表明,卵巢癌是一种从起源、病理病生、临床分期及预后等方面均存在异质性的恶性肿瘤,在分子水平可以分成四种亚型(分化型、增殖型、免疫反应型和间质型)。因此有必要针对卵巢癌各个亚型展开研究,寻找新的治疗线索。与其他亚型相比,间质型卵巢癌具有独特的肿瘤微环境,多高表达与促间质生成相关的因子(如促成纤维细胞增生的FAP等)。而微环境中的肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)可促进肿瘤增殖、血管形成、转移以及耐药。但对环境中肿瘤细胞和CAFs之间相互关系,及其对肿瘤表型的影响还缺乏深入研究。本研究将针对癌细胞和成纤维细胞之间的相互反馈进行讨论,并对其在癌症治疗中潜在的应用价值进行评价。实验方法:1、基于TCGA卵巢癌数据分析间质型卵巢癌微环境组成;筛查其区别其他亚型的分子特点;2、建立GLi1基因过表达卵巢癌细胞(OVCAR3、A2780)模型;通过荧光实时定量检测和Western Blot检测分析GLi1及下游靶基因的变化;通过EDU、六天增殖率及克隆形成评估Hh信号对卵巢癌细胞表型的影响;3、建立卵巢癌细胞(OVCAR3、A2780)上清培养CAFs的培养体系,通过荧光实时定量检测和Western Blot检测分析CAFs标志性基因的变化。通过EDU、六天增殖率及克隆形成评估卵巢癌细胞上清对CAFs表型的影响;4、建立CAFs上清培养卵巢癌细胞(OVCAR3、A2780)的培养体系,通过荧光实时定量检测和Western Blot检测分析卵巢癌细胞中GLi1及下游靶基因的变化。通过EDU、六天增殖率及克隆形成评估CAFs上清对卵巢癌细胞表型的影响;实验结果:1、基于308例卵巢癌的转录组数据我们发现,间质型卵巢癌微环境中免疫细胞显著减少,CAFs细胞显著增多;通过69例间质型卵巢癌与其他亚型的差异表达分析提示,间质型卵巢癌中Hh信号显著激活;2、qRT-PCR结果表明将卵巢癌细胞中GLi1基因过表达后,GLi1及下游CXCL12的mRNA水平显著上调。Western blot结果也表明GLi1过表达后CXCL12的蛋白表达量显著升高。3、培养基交互共培养后,肿瘤相关成纤维细胞及卵巢癌细胞表型实验,呈现一个明显促进增殖趋势。实验结论:1、间质型卵巢癌微环境中免疫细胞显著减少,CAFs细胞显著增多。2、Hh信号通路的激活可以促进微环境中卵巢癌细胞的增殖。3、肿瘤相关成纤维细胞的外泌物可以诱导卵巢癌细胞的增殖。4、卵巢癌细胞可以促进肿瘤相关成纤维细胞的增殖。