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研究背景:乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)阳性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者标准化化疗方案中出现的化疗耐药会导致疾病出现不良预后。因而,亟待深入研究HBV~+HCC耐药机制。阐明其耐药的分子机制以及开发新的关键治疗靶点,将为患者提供新的治疗策略。方法:构建两组对阿霉素(doxorubicin,DOX)有抗性的HBV阳性肝细胞癌细胞系HepG2.2.15和Huh7-1.3。采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术分析体外培养的HBV~+HCC化疗敏感性和耐药细胞系中己糖胺通路基因的表达,蛋白免疫印迹(Western blots)、荧光素酶报告基因分析和体内种瘤技术,进一步研究揭示miRNA-325-3p/DPAGT1轴在HBV~+HCC化疗抗性中的作用。结果:长醇磷酸-N-乙酰氨基葡萄糖磷酸转移酶1(dolichyl-phosphate N-acetylglucosamine phosphotransferase 1,DPAGT1)在两种耐药肝癌细胞系中表达水平均显著上调(P<0.05或P<0.01 n=3),增强DPAGT1活性明显提高了耐药肝细胞癌的存活率;抑制或者沉默DPAGT1可抑制肿瘤细胞的生长(P<0.05或P<0.01 n=3);在耐药肝癌细胞系中DPAGT1上调,与干细胞相关标志物及ATP结合(ABC)药物外排转运蛋白表达增加有关(P<0.05或P<0.01 n=3);miR-325-3p在体外和体内对DPAGT1的表达起负调节作用,miR-325-3p能逆转体内和体外HBV~+HCC细胞中DPAGT1对DOX-R的作用。经动脉化学栓塞(transcatheter arterial chemoembolization,TACE)治疗后的HBV~+HCC患者,DPAGT1高表达(P<0.01)和miR-325-3p低表达(P<0.01)分别与不良的化疗反应相关。结论:1.在耐药DOX的HCC细胞中,DPAGT1表达上调。2.过表达miR-325-3p对DOX的化疗敏感性有显著促进作用。3.miR-325-3p通过调控DPAGT1逆转HBV~+HCC细胞对DOX耐药作用。