【摘 要】
：
双孢蘑菇（Agaricus bisporus）是一种广泛种植的食用菌,但其除了除鲜销外,以加工成罐头产品等初级加工居多,在加工过程中约有10%的残次菇、菇柄和碎屑等边角料被丢弃,且造成资源浪费。为此,本研究以双孢蘑菇边角料为原料,使用碱溶酸沉法提取双孢蘑菇边角料蛋白,以ACE抑制率和蛋白质水解度为主要指标,采用响应面设计对双酶法制备双孢蘑菇源ACE抑制肽的工艺进行了优化;然后通过大孔树脂、葡萄糖凝
【基金项目】
：
国家重点研发计划项目（2018YFD0400205）；
论文部分内容阅读
双孢蘑菇（Agaricus bisporus）是一种广泛种植的食用菌,但其除了除鲜销外,以加工成罐头产品等初级加工居多,在加工过程中约有10%的残次菇、菇柄和碎屑等边角料被丢弃,且造成资源浪费。为此,本研究以双孢蘑菇边角料为原料,使用碱溶酸沉法提取双孢蘑菇边角料蛋白,以ACE抑制率和蛋白质水解度为主要指标,采用响应面设计对双酶法制备双孢蘑菇源ACE抑制肽的工艺进行了优化;然后通过大孔树脂、葡萄糖凝胶层析法对得到的粗肽溶液进行了分离提纯,获取生物活性较高的组分,采用高效液相-质谱联用（LC-MS/MS）方法测定了ACE抑制肽的氨基酸顺序,并对其稳定性进行了验证;采用Discovery studio 2016分子对接法探究了活性肽的ACE抑制机制。以期为降血压功能食品或药品的潜在化合物开发提供科学依据和理论支撑,并为双孢蘑菇边角料的高值利用提供新途径。取得的主要研究结果如下:1.筛选了以双孢蘑菇边角料为原料提取蛋白的工艺条件。获得了采用碱溶酸沉法提取双孢蘑菇边角料蛋白的最优工艺条件为:料液比1∶3（W/V）、p H 9.9、提取时间2.6h、提取温度54.5℃,该条件下蛋白提取率达到60.76%。2.优化获得了双酶法制备双孢蘑菇边角料新型ACE抑制肽的工艺。选择经常被用来制备生物活性肽的五种蛋白酶为供试酶,对双孢蘑菇边角料蛋白进行酶解试验,以ACE抑制率和蛋白水解度作为考察指标,筛选出制备双孢蘑菇源ACE抑制肽效果最佳的两种酶分别为:碱性蛋白酶和复合蛋白酶,因此,以上述两种酶为供试蛋白酶进行复配,选择ACE抑制率为响应值,对双酶法制备双孢蘑菇源ACE抑制肽的工艺条件进行了优化。得到最佳工艺参数为:碱性蛋白酶∶复合蛋白酶=1∶1,p H值为8.4,酶解温度为44.5℃,酶解时间为3.5 h,此条件下ACE抑制率为65.12%。3.确立了双孢蘑菇源ACE抑制肽的分离纯化工艺。通过静态吸附试验确定了最佳的大孔吸附树脂,采用单因素试验探讨了最佳吸附树脂的最佳上样p H、上样流速、洗脱剂浓度和洗脱流速,然后利用葡萄糖凝胶G-100进行分级,并采用高效液相色谱测定纯化前后活性肽的分子量分布及纯化后活性肽的含量,然后采用反相高效液相色谱纯化分级后的活性肽。获得了最佳的大孔吸附树脂为DA201-C,其最佳纯化工艺为上样p H 5.0,上样流速2 BV/h,乙醇洗脱浓度70%,洗脱流速2 BV/h。在此条件下,活性肽的得率为92.65%。利用葡萄糖凝胶G-100分级后,获得的高活性组分通过高效液相色谱测定分析发现其可能由三种活性肽组成,其提取率为6.678%（以蘑菇蛋白计）,ACE抑制率达到80.68%,此时,IC50=0.9mg/m L,说明纯化效果良好,通过反相高效液相色谱进一步纯化,发现分级后的组分由三种物质组成,其活性分别为74.68%、86.95%和80.62%,半抑制浓度IC50分别为1.25mg/m L、0.84mg/m L和0.92mg/m L。4.分析了双孢蘑菇源ACE抑制肽的作用机理及其稳定性。利用液质联用（LC-MS/MS）法鉴定了纯化后3种ACE抑制肽的氨基酸序列,分别为:LVYP（Leu-Val-Tyr-Pro）、VYPW（Val-Tyr-Pro-Trp）和YPWT（Tyr-Pro-Trp-Thr）;然后采用Discovery studio分子对接软件分析了活性肽与ACE受体的结合方式,发现VYPW和YPWT两种四肽与Zn2+结合位点附近的酶活性位点结合,三种活性肽均占据S1和S2活性口袋,并分别通过与ACE受体中的Ala354、Gln281、His353和His513;Glu384、Tyr523和His353;Glu384和Ala354,及其他氨基酸残基结合,通过模拟胃肠道消化酶验证试验表明,获得的ACE抑制肽具有良好的稳定性。
其他文献
多孔淀粉（Porous starch,PS）是一种新型改性淀粉,与天然淀粉（Native starch,NS）相比,拥有更大的比表面积和更高的吸附性能,且在后续反应中能暴露更多的反应位点从而提高反应效率。羧甲基淀粉（Carboxymethyl starch,CMS）因其良好的水溶性被广泛研究,但其较低的比表面积限制了后续应用。将氯乙酸钠（Sodium chloroacetate,SMCA）与PS通
LVDT传感器作为感知器件,在航空、航天等领域中发挥着重要的作用,其测量结果的准确性直接影响系统的控制与操作。随着系统中电子装备的增多,电子设备之间的电磁干扰影响愈发严重。LVDT激励信号以单频点、固定幅值的正弦信号为主,信号参数受外部影响时,传感器测量结果会出现偏差或错误。为了解决这些问题,提出了一种基于FPGA的产生、采集、测量和调整为一体的LVDT激励信号自稳定输出方案。经过仿真验证,当激励
磷酸二酯酶（PDE）通过介导c AMP水解来调节病原菌营养生长、产孢、萌发和致病性等。前期研究发现c AMP-PKA信号途径参与了梨果黑斑病菌Alternaria alternata感知果实表皮蜡质信号进而启动侵染的过程,但c AMP降解酶PDE基因对A.alternata侵染结构分化的调控机制尚需进一步揭示。本文在对A.alternata PDEs基因克隆、生物信息学和基因表达模式分析的基础上,
凝乳酶是干酪生产过程中的关键酶,随着干酪的市场需求不断增加,小牛凝乳酶逐渐供不应求,人们不得不寻找其替代品。骆驼凝乳酶、羔羊凝乳酶、猪胃蛋白酶等动物源凝乳酶都具有较好的凝乳活力,它们的蛋白水解力较小,制作的干酪苦味小,风味和品质也较好。帕尔玛奶酪、高山奶酪、埃门塔尔奶酪等很多高品质的干酪都使用动物源凝乳酶进行制作。实验室前期发现,黄粉虫中肠匀浆液和后肠匀浆液凝乳活力具有明显差异,但对该现象没有深入
本试验的研究目的是探讨预制牛肝排工艺优化、Na Cl处理对牛肝脱腥以及预制牛肝排风味形成的影响,并探明预制牛肝排在冻藏期间的品质变化规律,为预制牛肝排的生产应用提供科学支持和理论依据,本试验分为三个部分:1.优化了预制牛肝排制作工艺。本试验对牛肝进行预处理、脱腥、腌制和烤制工序完成牛肝排制作,确定了食盐脱腥法脱腥效率较高且腥味值较低,并用正交试验设计优化腌制料配方,最后以响应面法优化了烤制时间、烤
钙/钙调素依赖型蛋白激酶（calcium/calmodulin dependent protein kinase,CaMK）是真核生物细胞Ca2+信号途径中钙调素（calmodulin,CaM）下游的一类重要靶蛋白,参与调控了植物病原真菌生长发育、胁迫响应、侵染结构分化及致病性等生理代谢过程,但其调控作用因病原物而异,存在多样性和复杂性。本研究以A.alternata为研究对象,在对AaCaMKs
壳寡糖（COS）是一种天然、安全且环境友好的水溶性低聚糖,由壳聚糖通过生物降解获得。COS具有调节果实生长发育,诱导果实抗病性的作用。但COS采前处理对厚皮甜瓜果实贮藏特性、冷害和采后愈伤的影响鲜有报道。本研究采用1.25 m L/L COS浸泡‘玛瑙’厚皮甜瓜种子,并在果实发育的幼果期、膨大前期、膨大后期和采收前期用2 m L/L COS喷洒植株和果实,评价COS处理对厚皮甜瓜果实贮藏特性、冷害
甘肃甘南特殊的生态环境孕育出宝贵的菌种资源,当地的传统牦牛发酵乳是牧民利用自然环境中的微生物发酵而成,蕴含大量待开发的优良乳酸菌。本试验以甘肃甘南地区的传统牦牛发酵乳为研究对象,基于Illumina Mi Seq高通量测序技术解析传统牦牛发酵乳的细菌菌群多样性。通过传统分离培养技术分离纯化乳酸菌,对低p H耐受性、胆盐耐受性、模拟人工胃肠液耐受性、表面疏水性和自聚集能力进行了递进评价,筛选具有优良
扩展青霉（Penicillium expansum）是重要的采后病原真菌,可引起多种温带水果的青霉病,其中以苹果青霉病最为典型。Pac C是真菌Pal/Rim-p H信号通路转录因子,不仅调控生长发育,还可调控致病性。本研究采用P.expansum野生型菌株（WT）和Pac C缺失突变株（ΔPePacC）分别接种“富士”果实,观察接种果实其致病性和果实不同组织p H及内源性激素含量变化;利用RNA
二氧化氯（ClO2）是国际公认的A1级消毒剂,广泛应用于采后果蔬的消毒和保鲜,但ClO2是否影响马铃薯块茎愈伤尚未见报道。本研究用25 mg/L ClO2处理人工模拟损伤的“大西洋”马铃薯块茎,测定愈伤期间块茎的失重率和病情指数,观察软木脂和木质素在伤口处的积累,研究部分初级代谢（糖代谢）和次级代谢（活性氧代谢、苯丙烷代谢及脂肪酸代谢）在愈伤中的作用。结果表明:1.ClO2处理降低了愈伤期间损伤块