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目的:分析石蒜碱(Lycorine)对人骨肉瘤(Osteosarcoma,OS)细胞的抑制作用及其潜在分子机制。方法:CCK8法检测石蒜碱对人OS细胞(143B,MG63,SaoS2,U2OS)和人正常细胞(MIHA,HK-2,HEB,HS-5)的半抑制浓度(IC50);结晶紫染色法和克隆形成实验检测石蒜碱对OS细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞周期阻滞;划痕愈合实验和Transwell小室法分别检测细胞迁移和侵袭能力;Hoechst 33258染色法和流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测增殖相关蛋白PCNA,细胞周期蛋白CylinD1和CylinE1,上皮间质转化(EMT)相关指标Snail、Vimentin、N-cadherin和E-cadherin,细胞外基质(ECM)降解指标MMP-2、MMP-7和MMP-9,线粒体凋亡途径相关蛋白Bcl-2、Bax、Bad、Fadd、Caspase8和Caspase9,死亡受体凋亡途径相关蛋白Caspase3、cleaved-Caspase3、PARP、cleaved-PARP的蛋白水平。然后,采用荧光素酶报告基因实验分析相关信号通路的活性,Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路中β-Catenin及下游靶分子c-Myc的表达,以及ERK1/2/MAPK和PI3K/AKT信号通路中的总ERK1/2、p-ERK1/2(T202/Y204)、总AKT和p-AKT(S473)的水平。最后,构建裸鼠OS原位移植模型,观察肿瘤生长,H&E染色分析OS的肺转移,免疫组化检测PCNA、N-cadherin、Bcl-2、β-Catenin的表达和p-ERK1/2(T202/Y204)、p-AKT(S473)的水平。结果:结晶紫染色、CCK8、流式细胞术和克隆形成实验结果表明石蒜碱明显抑制OS细胞143B,MG63,SaoS2和U2OS的增殖,但对人正常细胞MIHA,HK-2,HEB和HS-5的毒性较小。划痕愈合实验和Transwell小室法显示石蒜碱可抑制OS细胞的迁移和侵袭,Hoechst33258染色法和流式细胞术结果表明石蒜碱能诱导OS细胞凋亡。荧光素酶报告基因实验显示石蒜碱处理后,Wnt/β-catenin,ERK1/2/MAPK和PI3K/AKT信号通路转录活性降低。Western blot结果显示:石蒜碱处理OS 143B细胞后,增殖相关蛋白PCNA表达水平下降,细胞周期主要阻滞在G1/S期,CylinD1和CylinE1蛋白水平下降;迁移侵袭相关指标Snail、Vimentin、N-cadherin、MMP-2、MMP-7和MMP-9蛋白水平下降,E-cadherin蛋白水平上升;抗凋亡蛋白Bcl2水平下降,凋亡相关蛋白指标Bax、Bad、Fadd、Caspase8、Caspase9、Caspase3、cleaved-Caspase3、PARP、cleaved-PARP蛋白水平均上升;总ERK1/2、总AKT的蛋白水平无明显改变,但p-ERK1/2(T202/Y204)、p-AKT(S473)的水平明显下降。裸鼠原位OS移植模型中,石蒜碱明显抑制瘤体生长,抑制OS的远处肺转移,IHC结果显示,石蒜碱能下调PCNA、N-cadherin、Bcl-2、β-Catenin的表达和p-ERK1/2(T202/Y204)、p-AKT(S473)的水平。结论:石蒜碱可能通过阻断Wnt/β-catenin、ERK1/2/MAPK和PI3K/AKT信号通路来抑制人骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进细胞凋亡。