前言 采用消减杂交技术检测肿瘤异常表达的基因文库，可筛查出可能与肿瘤形成和转移相关的基因，以便进一步确定新的分子诊断标志物和治疗靶点。在中国医科大学遗传学教研室孙秀菊等先前进行的研究中一种人核糖体小亚基蛋白(rpS)基因—rpS24由抑制性消减杂交检测(肿瘤差异正常组织)而确定为胃癌高表达基因。核糖体蛋白(rp)主要参与组成细胞中合成蛋白质的细胞器—核糖体。另外，研究还表明许多核糖体蛋白具有与蛋白质合成功能无关的其他作用(即核糖体外作用)。分子生物学的进展已经揭示了肿瘤的发生、发展基本上是由癌基因激活及抑癌基因失活引发的一系列细胞生理活动的恶性改变，如快速生长、无限制增殖、浸润和远处转移等。因此，肿瘤细胞必须形成高水平的蛋白质合成能力，以满足其快速生长、增殖和进一步恶性转化的需要。目前已有大量研究表明蛋白质合成异常是重要的促肿瘤发展因素，尤其是真核细胞蛋白质合成细胞器成份(如核糖体蛋白)基因的异常表达已被发现与多种细胞的恶性转化及肿瘤的进展有关。对这一领域的进一步研究将有助于找到肿瘤临床诊断的标志物和抗癌治疗实验的靶点。变异性剪接(也称选择性剪接或可变剪接)是指将同一个mRNA前体加工成外显子组成不同的多个正常的mRNA异构体的过程。同一基因的剪接变异体可有不同的功能。在特定的发育阶段或特定的组织细胞中剪接变异体的表达有利于发挥人类基因组的功能多样性。已发现在多种肿瘤中存在包括rp基因在内的一些与细胞凋亡、增殖、分化、信号传导或血管生成相关基因的剪接变异体，而且开始认识到“变异性剪接异常可能是人类疾病的一个共同特点”。在胃癌方面已有数篇关于rp基因或剪接变异体表达方面的研究报道。目前研究发现人pS24mRNA可经变异性剪接产生两种转录本＊pS24p和fpS24p入这两种pS24 mRNA剪接变异体可在多种正常组织和肿瘤细胞系中表达。本研究的目的是检测 rPS24 InRNA剪接变异体在胃癌中的表达情况，并对其临床意义进行初步探讨。 实验材料与方法 1．研究对象 收集60例胃癌患者手术切除组织标本和7例胃良性溃疡患者胃镜活检组织标本。胃良性渍疡的诊断依据是胃镜标本的病理诊断结果。 2．标本收集 胃镜活检标本取材后直接提取RNA，将NA保存于－70℃冰箱中；胃癌标本术中取材，置液氮中速冻10分钟，然后运输至－70℃冰箱中保存待用。 3．总RNA提取 取SO叫 毫克组织，加人1毫升TRlz0L试剂，再参照试剂盒说明书进行操作。 4．逆转录PCR（RT－PCR）将提取的RNA逆转录合成第一链CDNA。再以此为模板，采用剪接位点特异性引物扩增pS24基因片断，以p－actin作为反应的内对照。 5．PCR扩增产物的检测和半定量分析 取PCR产物进行聚丙烯酷胺凝胶电泳，摄下并保存电泳图像；采用 Gel。rk－ID软件，对电泳图像中目的基因和内对照p－actin的扩增产物条带分别进行光密度值分析；通过计算表达指数，对目的基因的表达进行半定量分析，以反映目的基因在组织中的表达水平。目的基因的表达指数二目的基因条带的光密度偷相应的p－achn条带的光密度值 0．统计分析 胃癌或胃溃疡组织中psz’ mawl表达水平与正常对照粘膜之间的比较采用配对t检验。按每个临床病理因素 ·2·分组后，胃癌组织中pS24 mR］VA表达水平在二组间的比较采用组间t检验，而胃癌组织中＊：34C mRNA表达比率间的比较也采用组间t检验。pS24c mRNA表达比率（百分率）＝pS24c mRNA表达指urpS24 mRNA表达指数 x 100％，将此百分率的小数形式仲）进行一in e换后，再进行统计分析。P＜0．05为有统计学意义。 实验结果 1．pS24 mRNA及其剪接变异体（pS24a和pS24c）在胃癌和胃溃疡中的表达 叩＄4二＊＊A在胃癌组织标本中的表达水平（表达指数：均值。标准差 0．6570。0．1314；n＝60）与同一病例的癌旁正常对照胃粘膜标本（表达指数：均值。标准差0．3713 to．0582）相比，显著增高（P＜O．01厂增高呈中等程度（胃癌／正常倍数比值的范围：0．892－3．568，均值土标准差 1．815土0．4971）。所有的胃癌病例的标本均出现pS24a mRNA这种剪接变异体；而pS24c mRNA这种剪接变异体则以不同的表达比率出现于58／6006．7％）例肿瘤组织标本（pS24C表达匕率的范 围：0－sl．0啪）和7／60（11．7伪）例癌旁正常粘膜标本（pS24C表达比率的范围刃－19．6％）中。pS24 mRNA在胃溃疡组织标本（表达指数：0．3592。0．0411；n二7）和同一病例的正常对照胃粘膜标本（表达指数：0．3674。0．0521）中的表达水平无显著差异。所有的胃溃疡病例的标本中仅出现pS24a mRNA剪接变异体。 2．pS24 mRNA的表达与胃癌临床病理因素的关系 TNM Ill＊期病例肿瘤标本中的吵班 mRNA表达水平显著高于TN MIJ期病例汀＜o．05人 3．pS24c mRNA剪接变异体表达比率与胃癌临床病理因素的