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斑马鱼(Danio rerio)作为一种重要的模式生物,已被广泛应用于生物学各个领域,如在生物医学研究方面,斑马鱼作为研究脊椎动物的发育和造血的模型已被广泛采用。近年来,斑马鱼也被逐步应用于免疫相关的实验。转化生长因子β-激活激酶1(Transforming growth factorβ-activated kinase 1,TAK1)是MAP3K家族的成员,脊椎动物的TAK1在人和哺乳动物中能够调控由IL-1介导的NF-κB,JNK和p38的激活;TRAF家族相关的NF-κB激活因子(the TRAF family member-associated NF-κB activator,TANK)能够参与调控核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路。但是在斑马鱼中少有关于TAK1和TANK在天然免疫中功能的报道。为探究TAK1和TANK在斑马鱼天然免疫中的作用,本研究团队率先在斑马鱼中展开对TAK1和TANK的功能研究,克隆并获得了一种斑马鱼TAK1剪接异构体(Danio rerio TAK1,Dr TAK1)和斑马鱼TANK基因(Danio rerio TANK,DrTANK),Dr TAK1开放阅读框(Open reading frame,ORF)含有1 737个核苷酸,编码578个氨基酸,其主要结构域包括N端的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶结构域和C端的卷曲螺旋结构域。DrTANK的开放阅读框包括1 047个核苷酸,编码349个氨基酸;同时,通过网站预测了DrTAK1相对分子质量为65kDa,等电点为6.64;DrTANK相对分子质量为39.27 k Da,等电点为5.64。但免疫印迹实验显示DrTAK1和DrTANK的蛋白大小分别约为72 kDa和50 k Da,这比预测的结果要大。通过免疫荧光试验,证实DrTAK1和DrTANK都是胞质蛋白,双荧光素酶报告试验结果显现在EPC细胞中单独转染DrTAK1不能诱导干扰素(Interferon,IFN)的产生,但将DrTAK1与DrIRF7共转染时能显著提高其诱导干扰素的表达,同时,后续的实验也验证了此现象有助于斑马鱼抵抗病毒。同样,在EPC细胞中单独转染TANK时也不能诱导IFN的产生,但是,当加入聚肌胞苷酸[poly(I:C)]和草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)刺激时,能显著增强其诱导IFN的表达。本研究结果表明DrTAK1和DrTANK在斑马鱼抗病毒天然免疫反应中可能具有重要作用,为后续DrTAK1和DrTANK功能研究奠定了基础。