BV2细胞在不同损伤神经环境下CD200R表达的研究

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目的小胶质细胞是中枢神经系统中最具有代表性的免疫细胞。自1891年首次描述小胶质细胞以来,其在中枢神经系统中作用越来越受到人们的重视。小胶质细胞在帕金森病(PD)、阿尔兹海默病(AD)及脑部炎症、缺血等多种神经系统病变中发挥着损伤和修复的双重作用。活化的小胶质细胞在中枢神经系统的固有免疫反应中有许多作用,包括免疫炎症、诱导、吞噬作用、细胞毒作用和通过抗原提呈的T淋巴细胞反应调节作用。小胶质细胞除了在病原体引起的中枢神经系统疾病中起到保护性免疫作用外,在慢性或病理性活化的时候也能引起组织损伤。最新研究显示CD200-CD200R通路是中枢神经系统内下调小胶质细胞活化的重要机制。CD200表达范围较广,主要表达在神经细胞、胸腺细胞、B细胞、T细胞、血管内皮细胞等。其受体为CD200R,主要表达在单核巨噬细胞系统(包括巨噬细胞、小胶质细胞、肥大细胞等)和少量的T细胞上,具有与其配体CD200非常相似的结构。CD200与CD200R结合触发细胞内信号级联放大的系统功能,控制并下调单核巨噬细胞系统的活化。本实验用BV2细胞作为小胶质细胞的替代,PC12细胞作为神经元的替代,小胶质细胞((BV2)分别与受损和正常神经元(PC12)共育,及用受损和正常神经元的上清液孵育,使小胶质细胞在不同的损伤神经环境中接受刺激后考察其CD200R的表达情况,来探讨活化的小胶质细胞与神经元之间的相互作用。方法对数生长期状态良好的PC12细胞用500nM鱼腾酮(Rotenone, RT)处理24h后换新鲜培养液(Conditione Media,CM), BV2分别与正常PC12细胞、500nM RT处理的PC12细胞共育培养及正常和损伤的PC12细胞上清孵育BV2细胞,正常1640培养液培养BV2细胞作为正常对照。两种细胞的共育培养用转移筛网(孔径8μm的transwell)间隔。共育培养或孵育24h后收集细胞进行试验。MTT检测细胞活力,倒置荧光显微镜观察细胞CD200R表达,ELISA定量检测CD200R蛋白表达。结果1、BV2细胞用PC12细胞正常或受损上清孵育组细胞存活率要明显低于对照组(P<0.05),BV2细胞与PC12细胞共育培养组细胞存活率略高于对照组,但无统计学差异(P>0.05)2、BV2细胞与500nM RT损伤PC12细胞共育组CD200R表达与对照组相比显著增多(P<0.05),而用受损PC12上清孵育BV2组CD200R表达与对照组相比显著减少(P<0.05)。BV2与正常PC12细胞共育组CD200R略增加,用正常PC12上清孵育BV2组CD200R略减少,但都无统计学意义(P>0.05)结论损伤神经细胞上清能够降低小胶质细胞CD200R的表达,而与损伤神经细胞共育能提高小胶质细胞的CD200R表达
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