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目的:研究分别以氧化吲哚碱和非氧化吲哚碱为主的两类钩藤在催眠及其神经细胞氧化损伤中的作用差异,为不同来源的钩藤药材的应用提供指导。方法:①通过优化单胺类递质及其相关物质的测定方法,运用高效液相-荧光检测器建立“一测多评”法测定不同脑区去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)、酪氨酸(Tyr)、多巴胺(DA)、3,4-二羟苯乙酸(DOPAC)、色氨酸(Trp)、3-甲氧基-4-羟基苯乙二醇(MHPG)、5-羟色胺(5-HT)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、高香草酸(HVA)共10种递质的方法,并对该方法进行了方法学考察。②给予昆明种小鼠不同剂量(80、40、20mg/kg总碱)的两类钩藤后,进行自主活动实验、戊巴比妥钠阈下剂量(3mg/ml)睡眠试验,运用“一测多评”法测定小鼠全脑及其海马、纹状体、皮质各脑区的10种递质含量,研究钩藤催眠作用机制。③运用钙沉积法提取肝微粒体,BCA法定量蛋白,分别采用CO吹泡法和还原法测定肝微粒体(蛋白浓度约为10mg/mL)细胞色素P450酶与细胞色素b5含量,研究钩藤对肝药酶作用,探讨两类钩藤催眠作用的差异原因。④两类钩藤总碱预处理PC12细胞数小时后,加入谷氨酸(24mmol/l)和过氧化氢(180μmol/l)共培养一段时间,MTT法测定细胞存活率,考察钩藤总碱对不同神经细胞氧化损伤的预保护作用。结果:①在优化建立的色谱条件下,10种递质在0.1000~2463.2ng/ml范围内线性关系良好(r=0.9991),最低检出限在0.3~2.4ng/ml之间,平均回收率在93.28%~97.39%之间,相对标准偏差在0.67%~5.01%之间,方法操作简便快捷、检出限低、分离度好、回收率高、结果准确可靠;在一定线性范围内,NE、E、Tyr、DOPAC、Trp、MHPG、5-HT、5-HIAA和HVA各递质与DA间的相对校正因子分别为1.44、1.17、1.08、0.50、0.97、5.9、3.66、3.43、1.00,且在不同色谱柱、流动相比例、pH、检测波长、柱温、流速等实验条件下耐用性良好(RSD在1.5%~4.9%之间),递质中采用校正因子计算的含量值与外标法实测值之间没有明显差异。②0910钩藤生物碱可减少小鼠自主活动(P<0.01)、显著增加阈下剂量戊巴比妥钠实验睡眠小鼠个数(P<0.001),降低海马、皮质等部位醒脑相关物质DA、NE的水平和加速其代谢,升高海马、纹状体睡眠相关物质5-HT水平、减少其转化率和加速其生成,从而减少觉醒物质,发挥催眠作用;0904钩藤生物碱可减少小鼠自主活动(P<0.01)、对阈下剂量戊巴比妥钠睡眠小鼠个数无影响,升高皮质、海马部位醒脑相关物质NE、DA的水平,降低皮质5-HT水平,从而发挥清醒作用。③0910钩藤生物碱无显著肝药酶诱导作用(P>0.05),0904生物碱对肝药酶具有诱导作用(P<0.01),从而解释了钩藤在戊巴比妥钠睡眠实验中的差异。④0904钩藤生物碱对谷氨酸和过氧化氢诱导的PC12细胞氧化损伤均有显著保护作用(P<0.001),但0910生物碱只对H202诱导的PC12细胞氧化损伤有显著保护作用(P<0.001),可能与两种损伤依赖的作用通路不同有关。结论:建立“一测多评”法测定脑内去甲肾上腺素、多巴胺、5-羟色胺等10种单胺类递质及其相关物质,探讨了钩藤主要品种钩藤(Uncaria rhynchophylla(Miq.)Jacks.)的两类钩藤生物碱催眠的作用机制;发现钩藤药材在戊巴比妥钠催眠实验中的差异至少部分归因于该药材生物碱是否对肝脏药物代谢酶起诱导作用;两类钩藤生物碱在神经细胞氧化损伤中具有一定的保护作用,但作用存在差异,为钩藤药材的脑保护作用机制研究提供了方向;此外,通过钩藤生物碱的脑递质测定结果提示,两类钩藤生物碱可能在脑缺血和阿尔兹海默病、抑郁等神经系统疾病方面存在治疗作用的异同点。这些结论表明两类钩藤在神经系统相关作用中存在差异,提示在临床使用时应注意区别使用。