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星状病毒（Astroviruses,AstVs）属于星状病毒科,可分为哺乳动物星状病毒属（Mamastroviruses,MAstVs）及禽星状病毒属（Avastroviruses,AAstVs）。星状病毒为无囊膜、单股正链RNA病毒,其基因组全长6.9-7.9 kb,包括5’UTR,ORF1a、ORF1b及ORF2三个开放阅读框及3’UTR和多聚腺苷酸（PolyA）尾。其中,ORF2基因编码的结构蛋白,不仅是分型的主要依据,而且与病毒的致病性和免疫保护性相关。感染星状病毒的禽类主要表现为病毒性胃肠炎、肝炎以及肾炎等。2016年起,我国江苏、山东、广东及安徽等地的雏鹅陆续发生一种以内脏尿酸盐沉积为症状的主要由鹅星状病毒（GAstV）感染引起的传染性鹅痛风疾病。患病雏鹅临床观察主要表现为关节肿大、跛行、腹泻等特征,临床剖检可见心脏、肝脏、肾脏及脾脏等内脏器官表面有明显的白色尿酸盐沉积。鹅痛风在不同品种的雏鹅均可发生,但主要发生于3-20日龄,具有较强传染性,死亡率可高达50%以上,给国内养鹅业造成了严重的经济损失。本研究围绕鹅痛风病开展了 GAstV的分离与鉴定、致病性试验、遗传特征分析及荧光定量PCR方法的建立与应用研究,丰富了 GAstV分子流行病学数据,且为GAstV临床快速诊断提供了技术支持。1.鹅星状病毒的分离与鉴定为分离获得GAstV,对采集镇江及宿迁鹅场疑似雏鹅痛风病的病料进行了PCR、冷冻切片间接免疫荧光和病理学组织检测的基础上,并将病料接种鹅胚和LMH细胞进行病毒分离。剖检后发现病鹅内脏器官有大量尿酸盐沉积,出现典型的痛风症状。对两份组织病料的PCR及冷冻切片间接免疫荧光分析分别检测到GAstV特异性核酸及蛋白抗原。两份病料经鹅胚盲传,鹅胚尿囊液不仅GAstV的PCR检测阳性,而且感染盲传鹅胚尿囊液上清的LMH细胞在间接免疫荧光检测中能与抗GAstV的ORF2的单克隆抗体进行特异性反应。说明成功分离到两株GAstV,分别命名为JS20及JSSQ。将分离毒株JS20在LMH细胞扩增后,通过同时皮下及口服途径原液（各1mL）感染1日龄雏鹅进行的动物预试验证明GAstV感染能导致雏鹅痛风的发生。JS20及JSSQ GAstV毒株的分离鉴定为进一步开展GAstV生物学特性研究提供了生物材料。2.两株鹅星状病毒的遗传特征分析为进一步明确JS20及JSSQ GAstV毒株的分子流行特点,我们对GAstV分离毒株JS20及JSSQ进行了全基因组测定、序列同源性与重组分析以及抗原变异分析。基因组测定发现,JS20及JSSQ的全基因组大小均为7175 nt,且具有星状病毒典型的基因组结构。JS20及JSSQ的全基因组与NCBI数据中GAstV参考毒株GD等的全基因组同源性高达99%以上,而与其它型GAstV的同源性低于60%。蛋白突变分析发现,与参考毒株GD比较,JS20及JSSQ在ORF1a、ORF1b及ORF2蛋白中均存在一些独特的突变。进一步通过SWISS-MODEL建模分析以及Protean抗原表位分析发现,JS20及JSSQ的ORF2中A224T、A228S、Q229P以及L540Q突变可能不仅能导致蛋白局部结构发生较大改变,而且能使ORF2抗原性或抗原表位发生改变。以上JS20及JSSQ GAstV毒株基因组测定及其分子特征的分析丰富了 GAstV分子流行病学数据。JS20及JSSQ的ORF2存在的这些突变是否与病毒感染嗜性、致病性及其中和抗体诱导等有关均有待于进一步解析。3.鹅星状病毒荧光定量PCR方法的建立与应用为了建立准确快速检测GAstV的方法,本研究利用GAstV分离毒株JS20为模板,根据GAstV的ORF2基因序列设计特异性引物,在构建重组质粒pGEMT-GAstV-ORF2的基础上,建立了检测GAstV的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法。研究结果表明,阳性对照重组质粒pGEMT-GAstV-ORF2 在 1.087×101-1.087×108 copies/μL 浓度之间与 qRT-PCR 的Ct值呈现良好的线性关系,R2=0.999。该qRT-PCR对所检测的鸡星状病毒(cAstV、禽腺病毒（FAdV）、小鹅瘟病毒（GPV）以及鸭坦布苏病毒（DTMUV）均无交叉反应,检测灵敏度为1.087×101 copies/μL,组内和组间变异系数均小于1.6%。qRT-PCR对JS20在鹅胚及LMH细胞上不同代次病毒载量检测发现,JS20在鹅胚上的扩增效率更高,病毒载量可达108-109 copies/μL。对江苏不同地区26份临床样品进行的比较检测发现,qRT-PCR方法的阳性检出率为73.08%,而普通PCR方法阳性检出率仅为42.30%。以上研究结果表明本研究建立的检测GAstV的qRT-PCR具有很好的特异性及灵敏度,且在病毒定量分析及临床样品检测诊断中展示了良好的应用前景。