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目的： 通过Invitrogens RNAi Designer软件设计及Blast验证针对小鼠F12基因mRNA的shRNA干扰序列，构建能够敲低凝血因子Ⅻ表达的病毒载体，进行体内和体外实验，为初步研究敲低凝血因子FⅫ对血栓形成的保护作用及FⅫ的功能奠定基础。 方法： 1. shRNA的设计及慢病毒的包装：Invitrogens RNAi Designer软件设计、合成三条针对F12基因mRNA的短发卡RNA:F12-shRNA1、F12-shRNA2、F12-shRNA3，分别克隆至 pHBLV-U6-Scramble-ZsGreen-Puro质粒，构建表达载体 pHBLV-U6-F12-ZsGreen-Puro，将重组质粒和包装质粒共转染HEK293T细胞，进行慢病毒的包装并测定慢病毒滴度。 2.体外shRNA功能的验证：培养AML-12细胞，并用慢病毒感染，荧光显微镜观察感染情况。采用RT-PCR技术检测F12基因mRNA的表达情况及用Western blot技术检测FⅫ蛋白的表达情况。 3.体内shRNA功能的验证：对筛选的有效序列进行腺相关病毒的包装并对小鼠进行尾静脉注射。采用RT-PCR技术检测小鼠肝脏F12基因mRNA的表达及用Western blot技术检测FⅫ蛋白的表达情况。 结果： 1.成功构建出针对F12基因的慢病毒载体，经包装、浓缩后获得较高滴度的病毒悬液，测定滴度达1×109 PFU/ml。 2.将分别含此三条序列的慢病毒感染AML-12细胞后，RT-PCR检测到F12-shRNA1实验组细胞mRNA的表达降低最明显，其他两条作用不明显。Western blot检测到F12-shRNA1实验组FⅫ蛋白表达降低明显，其他两条作用不明显。 3.小鼠注射含F12-shRNA1的腺相关病毒后，肝脏组织F12基因的mRNA和FⅫ蛋白均降低。 结论： 1.成功获取有效的干扰序列F12-shRNA1：CCACCATGGAAAGACTCCAAGAAAT。 2.在体外研究实验中，慢病毒感染离体培养的肝细胞AML-12后，能够抑制F12基因的翻译，从而降低蛋白的表达。 3.在体内研究实验中，小鼠尾静脉注射腺相关病毒后，能够降低小鼠肝脏中FⅫ蛋白的表达。 4.此次体内及体外抑制 FⅫ蛋白表达的实验，为后续的敲低 FⅫ来制造抗血栓模型的研究奠定了基础。