在细菌耐药研究中有关细菌主动外排泵的研究是相对活跃的领域。外排泵是微生物对药物和其他外来物质产生耐药性的一个重要机制,其中acrAB-tolC是一种常见的外输泵,是由药物外输蛋白AcrA、AcrB和调节蛋白MarA调控作用来完成的。本研究对福氏志贺菌多药耐药相关基因marA、acrA和acrB的克隆、蛋白表达、纯化及结晶进行研究。根据已有数据,设计marA、acrA和acrB基因引物,提取基因组DNA并通过PCR扩增目的基因,构建克隆载体后,分别将目的基因片段通过BamHⅠ和SalⅠ酶切位点插入表达载体pET-30a。经酶切鉴定及序列测定表明,目的基因片段连接正确,按正确的读码框插入表达载体中,其核苷酸序列与报道的marA和acrA基因的同源性为100%,acrB基因同源性为99.7%。重组表达质粒转化BL21(DE3)pLys, 37℃诱导表达,表达产物经SDS-PAGE检测表明,marA和acrA基因成功地在大肠埃希氏菌中得到了表达,表达蛋白的大小分别约为21kDa和45kDa。通过可溶性分析得知acrA为可溶性表达蛋白,marA以包涵体形式表达。利用高浓度尿素裂解包涵体,采用稀释法和氧化型、还原型谷胱甘肽系统相结合方法对marA蛋白进行复性。用金属鳌合亲合层析的方法对表达的marA和acrA蛋白进行纯化和浓缩纯化蛋白,测定表达蛋白的浓度为5 mg/mL,试验获得了能够结晶的高浓度蛋白。采用悬吊液滴蒸汽扩散法,对蛋白结晶条件进行筛选。观察发现,在多种结晶条件下出现了晶体,分别观察到八面体、菱形、针状等多种规则形态。本研究为福氏志贺菌耐药基因蛋白的高级结构,MarA,AcrA和AcrB的结合方式及探索MarA,AcrA和AcrB蛋白的其他功能奠定基础,同时为进一步研究福氏志贺菌耐药基因的作用机制提供依据。