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肠Remak神经(Intestinal nerve of Remak，INR)是禽类特有的一条自主神经节链，由空肠和十二指肠交界处延伸至泄殖腔，其间频繁地发出分支到肠道。不同于哺乳动物，禽类肠神经系统由内源性神经丛和INR共同组成，INR对禽类的消化、生殖都有重要的调节作用。P物质(Substance P，SP)是一种由11个氨基酸组成的脑肠肽，对维持肠道的正常功能起到重要的作用。本试验在光镜下研究鸡INR的显微形态，合成地高辛标记SP-RNA探针并用ISHH的方法从基因水平研究了SP-mRNA在INR内的分布，为进一步研究禽类特有的INR对消化、免疫和生殖等生理过程的调节作用提供形态依据。试验Ⅰ鸡INR显微形态学研究INR是禽类特有的一条神经节链。取鸡IN制备冰冻切片并将切片分别进行苏木精-伊红和甲苯胺蓝染色。在光镜下观察INR内神经元的形态，统计神经元的数量，测量神经元的面积并用SPSS软件对数据进行分析。通过观察发现，不同肠段INR内神经元的形态存在差异。数量统计显示INR神经节内包含大量的神经元胞体，一只鸡的INR内神经元的总数为31821个，并且直肠段INR内的细胞数量最多，为27109个。空肠段INR内神经元的平均面积最大，达到478.46μm~2，面积较大的神经元所占的比例也最高；而直肠段INR内单个神经元的平均面积最小，约为391.74μm~2。可以推测不同段INR中神经细胞的形态、大小和数量具有一定差异，这种差异可能与其对胃肠道功能的调节有关。试验ⅡSP-mRNA探针的合成以GenBank中查得的序列号为XM 418674的SP-mRNA序列为参照设计引物。提取鸡的总RNA，通过反转录套式PCR扩增目的片段从鸡的总RNA中扩增SP基因片段，将目的DNA的纯化回收后，用TA克隆的方法将目的片段克隆到pGM-easy T载体中并转化大肠杆菌，挑取阳性克隆，测序鉴定为目的片段。分别利用pGM-T easy质粒中T7和SP6启动子及T7和SP6RNA聚合酶，以，线性化的SP／pGM-T easy为模板转录合成正、反义DIG标记RNA探针。将合成好的DNA探针进行纯化，然后进行斑点杂交实验检验探针的标记效率和浓度。斑点杂交实验表明探针合成成功，浓度接近100 ng／μl，可以用于ISHH试验。试验ⅢINR内的原位杂交反应通过原位杂交(in situ hybridization histochemistry，ISHH)技术，用自行合成的探针探查SP-mRNA在鸡INR中的分布情况．结果表明，鸡INR中ISHH阳性神经元数量众多，空回肠段和直肠段INR中的阳性细胞分别占神经元总量的82.98％和98.01％。阳性细胞呈多突起的椭圆形或梭形，在INR神经节中较有规律地层状分布或成群出现，在神经节边缘分布更为密集，并且在节间束也有少量的阳性细胞分布。本试验从基因水平证明INR中大部分神经元有SP的mRNA转录，这些神经元作为外来SP神经纤维支配肠道和输卵管。