紫魁茶树组培快繁及再生体系研究

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紫魁茶树是从贵州本地茶树种质资源湄潭苔茶群体种(Camellia sinensis‘Meitan-taicha’)中筛选获得的本地紫叶茶树新品系。紫魁茶树是制作红茶和绿茶的理想材料,可作为贵州本地特色优异种质进行推广。目前,紫魁茶苗短缺,成为限制其推广和应用的瓶颈。为了增加紫魁育苗数量和缩短育种周期,本研究以紫魁为材料,建立紫魁茶树组培快繁体系和再生体系。研究结果如下:一)紫魁茶树组培快繁体系的研究带腋芽茎段无菌体系的建立:以75%酒精与20%次氯酸钠组合设计试验。结果表明:在75%酒精消毒2 min,20%次氯酸钠消毒13 min的条件下效果最好,20 d后污染率为25.45%,死亡率为6.67%,存活率达到67.88%。腋芽萌发培养基的确定:在MS培养基中添加不同浓度的6-BA、IBA及GA3进行腋芽萌发诱导培养。结果表明:在培养基为MS+2.00 mg/L 6-BA+0.90 mg/L IBA+1.20mg/L GA3进行培养时,45 d后腋芽萌发率为94.29%,后续芽苗生长快速,腋芽健壮,叶片舒展。腋芽增殖培养基的确定:在MS培养基中添加不同浓度6-BA、NAA或6-BA、IBA组合对腋芽进行增殖诱导培养。结果表明:在培养基为MS+3.50 mg/L 6-BA+0.20 mg/L IBA培养时,50 d后增殖系数达到了4.36,芽苗在切口膨大出芽,产生的丛生芽数目多。壮苗培养基的确定:在MS培养基中添加不同浓度6-BA和IBA进行壮苗诱导培养。结果表明:在培养基为MS+2.00 mg/L 6-BA+0.60 mg/L IBA进行培养时,45 d后株高差为2.12 cm、芽苗健壮且无枯萎现象。植株生根培养基的确定:无根苗在接种前用60.00 mg/L IBA无菌溶液浸泡8 min后,然后接种至附加不同浓度的IBA或NAA组合的1/2 MS或1/2 WPM培养基中进行生根诱导培养。结果表明:在培养基为1/2 MS+1.60 mg/L IBA时,60 d后生根率为68.57%,平均生根数为8.67,平均根长为2.23 cm,植株整体长势好。炼苗时间和移栽基质的确定:以炼苗时间与移栽基质组合设计试验。结果表明:自然光条件下炼苗6 d后,移栽至V黄壤土:V蛭石=2:1基质中,60 d后成活率为65.22%。二)紫魁茶树再生体系的研究种胚无菌体系的建立:以75%酒精与20%次氯酸钠两种消毒试剂组合设计试验。对种子进行消毒处理后,挑取种胚。结果表明:在75%酒精消毒3 min,20%次氯酸钠消毒10 min时消毒效果较好,20 d后种胚污染率为17.58%,死亡率为9.69%,存活率达到了72.73%。种胚萌发培养基的确定:在MS培养基中添加不同浓度GA3进行种胚萌发培养。结果表明:在培养基为MS+2.40 mg/L GA3培养时,60 d后种胚萌发率最高为93.64%,下胚轴长,根毛短,更适合后续切取胚轴。胚轴愈伤及分化培养基的确定:在WPM培养基中添加不同浓度的6-BA和IBA、6-BA和NAA及6-BA和2,4-D组合,对无菌苗的下胚轴进行愈伤组织及芽分化诱导培养。结果表明:下胚轴在培养基为WPM+2.00 mg/L 6-BA+0.10 mg/L NAA培养时较佳,60 d后愈伤组织诱导率为95.19%,不定芽分化率为20.74%。不定芽壮苗:将不定芽从愈伤组织切下,下端斜切。按照MS+2.00 mg/L 6-BA+0.6mg/L IBA的条件下,进行壮苗培养。无菌苗的生根、炼苗和移栽:将壮苗培养基中长势健壮、高度5 cm左右的无根苗下端斜切,用60.00 mg/L IBA无菌溶液浸泡8 min,按照1/2 MS+1.60 mg/L IBA的培养基条件下,进行生根培养。将带有培养基的植株进行冲洗干净,移栽至配制好的V黄壤土:V蛭石=2:1移栽基质中。
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